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维生素E含量测定方法.docVIP

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高效液相色谱法对维生素E粉、E油含量的测定 色谱条件 色谱柱:采用C18 柱(长150 mm,内径4.6mm,粒径4-5μm) 流动相:甲醇(色谱醇)+水(去离子水) 比例:(98 + 2 ) 流速:1.2 ml/min 检测波长:285 nm 柱温: 25±2 ℃ 进样量:20 μL 溶液制备 标准溶液的制备: 本实验室的标准品为液体油状物,因此用注射器抽取直接滴加到容量瓶中称量,把容量瓶放在分析天平托盘上然后滴加,称取维生素E标准品约0.1g(准确至0.0002),置50mL棕色量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,摇匀。 绘制标准曲线 把制成2.008 mg/mL的溶液作为贮备液。分别准确移取0.5、1.25、2.5、3.75、5mL 至10mL的棕色量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀;得到浓度分别为0.1004、0.251、0.502、0.753、1.004mg/ml的五种溶液,分别经0.45μm 滤膜滤过,滤液作为标准溶液。 用100μL的进样针分别从制备的不同浓度的标准溶液抽取60μL溶液,注意不能带有气泡,注入液相色谱仪,按色谱条件操作,从0.1004——1.004mg/ml依次进样,记色谱峰面积以标准品溶液浓度(C)为纵坐标,峰面积(A)为横坐标,按照外标法过5点绘制标准曲线。 样品溶液的制备: 维生素E粉样品溶液的制备 制备步骤为:研磨→称量→水浴溶解→定容→过滤 研磨 把试样E粉倒入研钵中适量,用研磨棒轻度研磨至颜色有变化为止。 称量 把称量纸放到分析天平上然后置零,把研磨好的试样用药匙转移到称量纸上,称取维生素E 粉约1g(约相当于维生素E 0.5g,准确至0.0002g),置 水浴溶解 加甲醇适量,置超声波水浴器中助溶20 min。 移取定容 冷却至室温,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀,从制备好的溶液中移取1mL到10mL的容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀;再从制备好的10mL容量瓶中的溶液中移取2.5mL放置到10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀。 过滤 把制备好的溶液经0.45μm 滤膜滤过,滤液作为样品溶液。 维生素E油样品溶液的制备 用注射器直接抽取E油样品滴加到放在分析天平上的容量瓶中,称维生素E油样品约20mg,(准确至0.0002),置50mL棕色容量瓶中,加甲醇适量溶解,置超声波水浴中助溶10min,冷却至室温,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀;经0.45μm 滤膜滤过,滤液作为样品溶液。 测定步骤 用100L的进样针抽取60μL的维生素E粉、E油的样品溶液,注入液相色谱仪,按色谱条件操作,得到色谱峰面积(Ai),每批次样品溶液做三个平行样,根据标准曲线上各点的峰面积(Ast) 计算和结果的描述 计算公式 维生素E的含量X2以质量分数(%)表示 X2= eq \f (mst×Pst×Ai,mi×Ast) ×100% 式中: X2——样品中维生素E的含量﹙%﹚ mst——标准品的质量﹙g﹚ mi——样品的质量﹙g﹚ Pst——维生素E标准品的含量﹙%﹚ Ai——样品溶液中维生素E的峰面积 Ast——标准溶液中维生素E的峰面积

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