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2010生物高考“基因工程”考点解读 一、 真题解析　　（2010年江苏省第27题） 下表中列出了几种限制酶识别序列及切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的位点。请回答下列问题：　　（1） 一个图1所示的质粒分子经Sma I切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。　　（2） 若对图中质粒进行改造，插入Sma I 酶切位点越多，质粒的稳定性越 。　　（3） 用图中的质粒和外源ＤＮＡ构建重组质粒，不能使用Sma I切割，原因是。　　（4） 与只是用EcoR I 相比较，使用BamH I和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。　　（5） 为了获取重组质粒，可将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入。　　（6） 重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　 。　　（7） 为了从cDNA 文库中分离获取蔗糖转基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖的能力的大肠杆菌突变体，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。　　解析（1） DNA是由脱氧核苷酸通过磷酸二酯键（见下图中标号①）连接成DNA单链，两条DNA单链通过碱基互补配对原则相连形成双链(见下图中标号②），质粒的DNA分子为环状结构，因此没有磷酸基团游离，经过Sma I切割后，环状DNA分子中的磷酸二酯键断裂，因此便形成两个游离的磷酸基团。　　这一题给考生提出了一个新的问题情境，要求考生面对新的问题情境进行综合分析。情境虽新，许多答案的落脚点却是教材的基础知识，题目重点考查学生能否运用所学到的生物学知识和原理去分析和解答相关问题。　　二、 考点解读　　基因工程属于选修模块III“现代生物科技专题”。正如科学家所说，21世纪生物科学将是自然科学中最为活跃的学科，其发展趋势更多地体现在微观和宏观、理论与应用等方面，而基因工程是现代生物科学和技术中的研究热点之一。通过对基因工程的学习，能开拓视野、提高生物科学素养、激发探索生命奥秘和热爱生物科学的情感，为进一步学习现代生物学奠定基础。　　高中生物课程标准提出学生能简述基因工程的诞生、简述基因工程的原理及技术、举例说出基因工程的应用以及简述蛋白质工程，属于知识的了解水平。2008~2010年的江苏省高考考试说明中，除要求学生能对“基因工程的应用”理解所列知识点及其与其他相关知识点之间的联系和区别，能在一定的情境中运用它们并作出合理的判断或得出正确的结论，对其他三个部分的要求都是A，即了解所列知识点，并能在相对简单的情境中识别和使用它们，要求并不高。　　（1） 基因工程的概念：　　在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞并使重组基因在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术，又称重组DNA技术。　　（2） 基因工程的过程：　　① 获得目的基因。　　方法：从基因文库中获取；PCR扩增；化学方法人工合成。　　② 制备重组DNA分子　　方法：用一定的限制酶切割载体，使其出现一个有黏性末端的切口；用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端；将切下的目的基因片段插入到载体的切口处，再加入适量的DNA的连接酶，使载体与目的基因结合成重组DNA分子　　③ 转化受体细胞。　　转化植物细胞方法：农杆菌转化法；　　转化动物细胞方法：显微注射技术；　　转化微生物的方法：感受态细胞法。　　④ 筛选出获得目的基因的受体细胞。　　⑤ 接受细胞并诱导目的基因的表达。　　（3） 基因工程的工具。　　① 限制性核酸内切酶——分子手术刀。　　来源：主要从原核生物中分离纯化出来。　　作用：催化相关DNA的水解；对DNA进行切割，获取目的基因和载体。　　切割方式：　　错位切，产生两个相同的黏性末端（见下图）；　　平切，形成平末端（见上图）。　　切割位点：磷酸二酯键。　　切割要求：切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。　　② DNA连接酶——“分子针线”。　　作用：连接磷酸和脱氧核糖形成磷酸二酯键。　　DNA连接酶和DNA聚合酶的区别见下表。　　③ 载体　　条件：能在宿主体内稳定保存并大量复制；有一个或多个限制酶的切割位点，以便与外源基因拼接；有特殊的遗传标记基因，以便筛选。　　常用载体：质粒（它是一种裸露的、结构简单独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子）。　　其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。　　载体的基因组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。