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不同环境因子对草履虫种群生长的影响 摘要：为了研究不同环境因子对草履虫种群生长的影响，培养出优质的草履虫，分别在pH梯度为：6.0、65、7.0、7.5、8.0，光照梯度为：0 lx、500 lx、1 000 lx、1 500 lx条件下培养草履虫，结果表明，小白菜培养液培养草履虫的最适pH值为7.0，并且相比于弱酸性环境，草履虫更适宜在弱碱性环境中生长。在光照为0 lx条件下，草履虫数量在第4天时达到最大值4 073 ind/100 mL，在光照为500～1 500 lx条件下，随着光照度的增加，草履虫的种群数量也随之增加。关键词：草履虫；pH值；光照；种群密度1引言1.1研究背景大草履虫(Paramecium caudatum)属原生动物门, 纤毛亚门, 纤毛纲，体长只有80～300 mu;m，由一个单细胞组成，是动物学教学常用的实验材料,也是实验生物学的重要材料[1]。它除了应激迅速外，还具有分布广泛，繁殖速度快，结构简单，便于采集培养以及观察的特点，在细胞生物学、分子遗传学、分子生物学、生物信息学、仿生学等研究领域得到了广泛的应用, 同时也是环境保护科学用来进行环境监测和水质净化的活性生物材料[2～3]。本文旨在探讨pH值和光照对草履虫种群密度的影响, 从而为实现在实验室条件下，短时间内大量培养出纯度高、性状稳定的草履虫，以及为草履虫在水体环境监测中的应用提供理论依据。1.2研究进展草履虫是原生动物门的代表动物,对其采集、纯化及培养方面的研究，随着科研的进步，实验条件及设备的改进而不断发展。现有研究结果表明，23～27 ℃时大草履虫的分裂生殖最为旺盛，25 ℃为最适温度，低于10 ℃时不利于草履虫的繁殖[4]。当培养液酸性较强时(pH值为3.0和4.0),草履虫均死亡，草履虫仅能在弱酸性条件下正常生长,对酸的耐受范围在pH值5.0～7.0。当pH值高于9.0时,草履虫不能正常生长,草履虫只能在弱碱性条件下正常生长,对碱的耐受范围在pH值7.0～9.0。2材料及方法2.1实验材料烧杯、量筒、0～50 mu;L移液枪、纱布和皮筋若干、漏斗、载玻片，光学显微镜、电子天平、pH计、照度计等；新鲜的小白菜、氢氧化钠、浓盐酸等。2.2草履虫的采集和纯化草履虫通常生活在水流速度不大，深度较浅的水沟、池塘和稻田中, 并且大多积聚在有机质丰富、光线充足的水面附近。当水温在24～27 ℃时, 繁殖最旺盛, 数目最多。草履虫的这些习性, 是确定采集地点和方法的重要依据[5]。采集时到附近的水沟、池塘边, 选择没有污染的地方, 用清洁的大烧杯沿水面采集水样, 这样的水中往往含有许多草履虫，并且在距根部 10 cm处剪下并拔出处于生长状态的芦苇，拔出时带有少量的泥土, 将此芦苇根部再剪成 2～3 cm小段放于烧杯中,注入清水,放在温暖明亮处。一周以后, 用显微镜检查可见许多草履虫。上述采集到的草履虫，往往含有许多其它的小型生物以及杂质，要想获得纯度较高的草履虫，就必须经过分离纯化。具体采用微量分离法，即用50 mu;L移液枪吸取扩大培养后的培养液10 mu;L于干净载玻片上,在4倍显微镜下镜检，如发现草履虫及其它一些小型生物，将之转吸到另一块干净载玻片上,加10 mu;L小白菜培养液（小白菜培养液制作过程见2.3）按照1∶1比例稀释变成20 mu;L,用移液枪在同一块载玻片上再将其分成2滴,每滴10 mu;L,然后镜检，将含有草履虫的那一滴再加10 mu;L小白菜培养液再次按1∶1比例稀释变成20 mu;L,如此重复稀释3～5次后,直到在10倍镜下镜检确认已无其他生物为止。最后,将只含有草履虫的10 mu;L培养液吸入500 mL小白菜培养液中（在吸取时注意更换枪头以免混入其它生物），放于25 ℃光照培养箱中纯化培养1周,即可得到浓度较高的草履虫。若除草履虫外仍有较多其他生物及杂质,可重复用上述微量分离方法再次进行分离纯化。2.3培养液的制备本实验主要采用小白菜培养液，取新鲜洁净的小白菜，用剪刀剪碎,按照2 g小白菜搭配自来水1 000 mL的比例, 将小白菜和自来水放入烧杯中, 加热煮沸10～15 min,停止加热。待冷却至室温，先后用双层纱布、滤纸各过滤一次，以免一些杂质混入培养液妨碍草履虫的计数观察。为了防止空气中其它原生动物的包囊落入以及蚊虫产卵, 烧杯口要用双层纱布包好, 然后放置在温暖明亮处进行细菌繁殖。经过24 h后,小白菜培养液即可用于接种使用。2.4接种接种是指将扩大提纯后的草履虫转移到培养液的过程。按照上述分离提纯时所用的方法，接种时, 先将含有草履虫的液滴吸到干净的载玻片上,置于低倍显微镜下镜检, 如果发现液滴内只有草履虫, 可用移液枪将草履虫吸入到盛有小白菜培养液的250 mL小烧杯中进行繁殖。如果液滴内除了草履虫还有