如何构建质粒克隆教学提纲.pptVIP

如何构建质粒克隆周鸿雁2011;目的基因目的载体BaxpCMV;MCS多克隆位点 Ba;pCMVSPORT6 MCSG;构建过程★ 设计引物 (增加;第一步：设计目的基因PCR引物;设计引物前需解决的问题? 1;PEGFP MCS选择酶切插入;BAX insert sequ;enzymeBAXbuffer;AGATCT ---- Bg;酶切位点保护碱基protect;设计引物原则引物的长度一般为1;cggcgg tgatggac;引物中是否应包含终止密码子？M;加入保护碱基及酶切位点Prim;★ MCS与荧光相连的地方应特;荧光表达在前时(EGFP)Pr;荧光表达在后时 (DsRed);荧光表达在后时需加KOZAK ;Primer finalPri;33.5 uL dH2O10;Buffer3 : 2ulve;第四步：琼脂糖凝胶电泳、凝胶回;Buffer3 : 2ulBA;第六步：回收效率验证5kb2.;T4 ligase buffe;第七步：转化 100ul DH;第八步：验证 (1)PCR1-;第八步：验证 (2)双酶切 (;第八步：验证 (3);谢谢，敬请批评指正！;克隆连接平端连接 难连接粘端