《作物育种学各论》第五节育种新技术.ppt

抗虫棉基因的转化过程 1、雄性不育系的培育 花药中的绒毡层对小孢子的发育起了很大的作用。绒毡层的提早或延迟解体往往导致小孢子不正常发育而表现雄性不育。 比利时植物遗传系统(Plant Genetics Systems)和美国加州大学洛杉矶分校的科学家合作，把绒毡层专化启动子和核糖核酸酶(RNase)的嵌合基因导入到植物中，使核糖核酸酶基因专门在绒毡层中表达以降解RNA，导致绒毡层发育的障碍，提早解体而导致不育。 * 第五节 棉花育种新技术 的研究与利用 (Cotton, Gossypium L.) 一、细胞与组织培养 （一）胚珠培养 多用于克服远缘杂交不实性、为杂种幼胚提供人工营养和发育条件，使幼胚能在胚乳生长不正常或解体的情况下发育成苗，打破种间生物学隔离的障碍。 最早选用的试验材料为成熟的种子，培养技术改进后，将种间杂种不同天数的胚珠作为培养对象。 现代的具体培养方法： 材料：一般选用3-5日龄已受精的胚珠或15日龄以上的幼胚。 培养基：以BT培养基，从氮源、碳源和附加物（包括生长调节物质、氨基酸等）设计不同的液体培养基或添加植物激素的M5固体培养基。 培养方式、时间和条件：采用静置暗培养，时间为50-69天，温度为25±2℃。 （二）茎尖、腋芽等外植体培养 在棉花以分生组织、叶柄、茎尖、腋芽等作为外植体进行培养，诱导组织器官发生，直接形成完整植株。 用于拯救和保存还难于收获种子的稀有棉属种质； 目前技术水平还不能大规模的扩繁。 （三）体细胞培养 体细胞培养是以种子发芽后胚轴子叶或以植株的叶片等体细胞组织作为外植体进行培养，形成胚状体进而诱导形成再生植株。 体细胞在培养过程中会发生各种各样的的突变体（很多是可遗传的），再生植株也有变异发生。真正能应用作物改良的变异是点突变、抗盐突变体及其他抗性突变体的筛选，以改良棉花品种； （三）体细胞培养 体细胞培养过程中可用多种处理方法对培养的体细胞筛选。如抗枯萎病、耐高温的细胞系或再生植株的筛选。 体细胞在杂种优势的固定、人工种子生产、资源快速鉴定和保存、人工纤维生产等方面有重在的用途。 （四）花药培养 棉花花药培养的目的在于诱导花粉单倍体，从而应用于遗传育种研究。 花药诱导成愈伤组织较易，但进一步诱导成再生植株的报道少； 花药诱导成愈伤组织中，大部分细胞为双倍体细胞，极少数为单倍体细胞。 （五）原生质体培养 陈志贤等（1989）、余建明（1989）报道成功地从陆地棉品种下胚轴体细胞培养发生细胞系，经继代培养分离出原生质体，再分化培养得胚状体和再生株，且定植成活。 目前仅限于少数几个基因型培养成功，且原生质体的植板率、正常胚胎发生频率和再生植株定植后成活率都比较低，还须进一步试验和研究。 二、棉花基因工程 棉花基因工程起步晚，1987年首次获得抗卡那霉素的第一例转基因植株，但发展很快。 目前已涉及棉花育种的各个方面，如抗虫、抗病、抗除草剂、抗逆境，纤维品质改良、杂种优势利用等。特别是抗虫、抗除草剂方面达到了应用的水平。 转Bt基因抗虫棉是世界上第一例在生产上大面积成功栽种的转基因工程植株。 棉花遗传转化方法 通过农杆菌转导基因（外国和中国） 通过基因枪转导基因（外国和中国） 花粉管通道法 （中国） （一）抗虫基因工程 主要集中于： 苏芸金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因(Bt) 豇豆胰蛋白酶抑制基因(CPTI)。 作为一个抗虫新品系应具有以下特点： (1)保护作用具有连续性，可以控制任何时期内发生的害虫； (2)只杀取食害虫，对非危害生物无影响； (3)整个植株均可得到保护，包括化学药剂很难作用的部位，如叶下表面及根部； (4)抗虫物质只存于植物体内，不存在污染问题； (5)投资少。 1．苏芸金杆菌杀虫晶体蛋白基因 作用机理： 苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)属于革兰氏阳性土壤杆菌，在芽孢形成的过程中，苏芸金杆菌可以产生大量的伴胞晶体，伴胞晶体由具有高度特性杀虫活性的结晶蛋白组成，这种蛋白通常被称为杀虫晶体蛋白(ICP)。 苏芸金杆菌的伴胞晶体随着昆虫的摄食进入昆虫的消化道，并释放出分子量为27—140KP的ICP。ICP通常以原毒素的形式存在，在昆虫幼虫的中肠道内，在蛋白酶的水解下，原毒素转型为毒性多肽分子，活化了的毒素可以与敏感昆虫中肠道上皮细胞表面的特异受体相互作用，诱导细胞膜产生一些孔道，扰乱细胞的渗透平衡，并引起细胞肿胀甚至裂解。伴随上述过程昆虫幼虫将停止进食，最终导致死亡。 单价转Bt抗虫棉中棉所31 单价转Bt抗虫棉国抗3号 单纯大面积利用转Bt基因的抗虫棉品种可能存在两个问题： 抗虫谱窄是一个很大的缺点，抗虫谱覆盖所有的鳞翅目昆虫，具体每一种Bt杀虫晶体蛋白抗虫谱