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实验操作流程包括: 1、制备MS固体培养基 1制 2消 3接 4培 5移 6栽 【思考及讨论】 利用手中的小纸片,模拟制备过程,注意各成分的添加顺序。 (1)配制各种母液: (2)配制培养基: (3)灭菌: 常温保存。使用时根据母液的浓缩倍数,计算用量,加水稀释。 灭菌方法是高压蒸汽灭菌(温度121℃,时间15~30分钟 ) 蒸馏水800ml 蔗糖30g 大量元素母液 琼脂10g 微量元素母液 有机物母液 植物激素母液 定容至1000ml,调节PH,分装到各锥形瓶(50或100ml/个) 演示课件 实验操作流程包括: 2、外植体消毒 1制 2消 3接 4培 5移 6栽 【思考及讨论】 熟读外植体消毒的流程,总结出口诀或顺口溜。 消毒液:70%酒精;0.1%氯化汞(又称升汞,有毒) 注意:在此消毒过程中,强度是不是越大越好,为什么? 考虑药剂的消毒效果以及植物细胞的耐受能力 演示课件 实验操作流程包括: 1制 2消 3接 4培 5移 6栽 【注意】通过视频学习:3接种;4培养;5移栽;6栽培四步, 特别注意实验操作方法。 用70%酒精将工作台擦拭,然后点燃酒精灯。 (1)接种前,如何进行消毒灭菌? (2)插入外植体时,为什么不能倒插? 插入外植体时,形态学上端在上,更利于茎段下部生根,吸收矿质元素和养料。 (生长素的极性运输;生长素/细胞分裂素比值高,利于根的分化) 所有的接种操作必须在酒精灯火焰旁进行, 并且每次使用器械后,都要用火焰灼烧灭菌。 (3)接种时每瓶接种6~8块外植体。只接种1块,行不行?为什么 避免偶然性误差 平行重复原则 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 演示课件 仙灵芝 清水芙蓉 墨牡丹 胭脂点雪 演示课件 演示课件 1、说明植物组织培养的基本原理。 2、学习植物组织培养的基本技术。 3、掌握实验操作过程中使用的无菌技术。(重、难点) 4、进行菊花或其他植物的组织培养。 学习目标 演示课件 植物组织培养的相关概念: (1)细胞分化:形态、结构和生理功能 ,选择性表达 (2)细胞的全能性:已经高度分化,完整个体 (3)愈伤组织:细胞分裂,疏松而无规则,高度液泡化, 无定形,薄壁 (4)脱分化:已经分化 ,愈伤组织 (5)再分化:愈伤组织 ,根或芽 演示课件 胡萝卜的组织培养示意图 演示课件 1、植物组织培养的基本原理是什么? 植物细胞的全能性 2、细胞为什么具有全能性? 构成生物体的细胞内含有该物种生长发育所必需的全部遗传物质 即具有完整的细胞核 3、实现细胞全能性,首先做的是? 在一定的时间和空间条件下,基因选择性表达;具有不可逆性 离体 选材:生长旺盛的嫩枝; 这些部位的细胞相对幼嫩,细胞分化程度低,细胞分裂能力强,细胞的全能性较高,更易诱导进行脱分化和再分化。 演示课件 4、实现细胞的全能性,除了离体外,还需要哪些条件? (1)离体(前提条件) (2)一定的营养物质 (3)植物激素 (4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等 条件: 大量元素 有机物 微量元素 提供无机盐 甘氨酸、维生素等: 蔗糖: (1)离体(前提条件) (2)一定的营养物质 (3)植物激素 (4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等 营养物质 MS培养基 作为碳源提供能量,维持细胞渗透压(必要成分) 满足离体细胞特殊的营养需求 注意:MS培养基以无机养料为主, 而微生物培养基以有机养料为主。 (2)一定的营养物质(成分?作用?) 演示课件 4、要实现细胞的全能性,除了离体外,还需要哪些条件? (1)离体(前提条件) (2)一定的营养物质 (3)植物激素 (4)环境条件:适宜的pH、温度、光照等 条件: (3)植物激素(种类?影响因素?) 植物激素:生长素(IAA或NAA等)、细胞分裂素(BA)等 A、激素的浓度 B、使用的先后顺序 C、用量的比例 演示课件
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