现代科技综述知识文库：光学实时监测脑神经元膜电位.pdfVIP

现代科技综述系列—— 光光学学实实时时监监测测脑脑神神经经 元元膜膜电电位位 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “光学实时监测脑神经元膜电位” 的解读，以供大家了解。 光光学学实实时时监监测测脑脑神神经经 元元膜膜电电位位 运用光学方法研究神经元膜电位活动是1968年由L ． B ．Cohen等提出的，他们发现枪鸟鲗巨轴突膜的内部 光学特性随着动作电位而改变。 同年，I．Tasaki等报道外部染色的轴突标本发出的荧 光随刺激而改变。 此后，Cohen实验室从197 1年开始寻找能给出强光学信 号的适宜化合物，用以监视神经细胞膜的电位变化。 到1978年，他们所合成的一些化合物使信号噪声比提 高100倍。 提供使用的膜电位分子探头已超过200种，其中一些类 型如下：XV 11，部花青类，用于测量吸收作用，双折 射；RH 1155，氧鎓醇类，用于测量吸收作用； RH4 14 ，苯乙烯基类，用于测量荧光；XXV ，氧鎓醇 类，用于测量荧光、吸收作用。 对于染料光学特性的测定包括吸收作用、双折射 荧 光3种信号的强度，目的在于选出最高信噪比的物质。 测量哺乳类动物大脑皮层时，若没有在皮层下植入光 导纤维，则使用透射光是不可能的；然而，使用反射 光可以测到较小的吸收信号W ．N ．Ross等，1977)， 故可以使用荧光测定H ．S．Orbach等，1985) 。 要选用一个电压敏感性分子探头监视神经细胞的膜电 位变化，应了解其时间分辨率。 例如，使用XV 11染料进行枪鸟鲗巨轴突实验时，它产 生光学信号后继膜电位变化的时间常数小于0 ．0 1ms， 超过可兴奋细胞电学信号产生的速率，因此，同时记 录电学信号与光学信号时，波形吻合极好。 这些染料对神经细胞的药理作用很重要。 在许多例子中得到最大光学信号所需的染料浓度 0 ．1 ～0 ．0 1mg ／m 1) 尚低于可测出药理学效应的浓度。 包括在枪鸟鲗巨轴突，组织培养中的成神经母细胞、 心肌、骨骼肌、藤壶的上颈神经节、胚胎鸡心、胚胎 半月神经节、口神经节中进行的测定。 在行为观测中，用染料与不加染料的正常藤壶进食行 为没有差别：长期饲养中的行为也未发现药理学影响 J ．A ．London等，1987) 。 有些染料的分子在强照明下可以敏化具有活性的单态 氧 其它自由基。 这些活性基会破坏膜成分并损伤细胞J ．P ．Pooler ， 1972) 。 因此，这种光动力学损伤限制了实验的持续时间。 目前提供的几种透射分子探头连续使用1～5min可不产 生显着损伤。 如果只用直流记录，每次测试50ms则可在出现明显损 伤前进行1200～6000次测试。 当然，使用一些抗氧化剂清除自由基可能是有希望 的。 此外，在强光照射下染料被漂白也是一个限制实验时 间的因素。 精确测量光时会受到系统中固有散粒效应噪声的限 制。 这是由光子发射 检波的统计学特性引起的，从而使 单位时间光子发射数量出现波动。 钨丝光源平均发射10 14光子／ms。 发射数目均方根的偏移是单位时间光子发射数量的平 方根，即107光子／ms。 在受到散粒效应噪声限制的情况下，信噪比与测得量 子数的平方根及光子测量系统的频带宽度成正比。 在这种条件下进行测量，如果要改进信噪比就只能增 强照明强度或测量系统的聚光效应，或者降低放大器 的频带宽度。 实际上，在1815C温度下，钨丝发射10 14量子／ms中 只有一小部分到达光探测器、一个理想的数值孔径 NA)为0 ．7 的物镜可以收集0 ．06 的发射光。 但在发射 收集的光子中只有0 ．2是在可见光的波长 范围，其它均为红外线 热) 。 如果再加上通过干涉滤光片30nm)，约只可透过0 ．05 可见光以及集光器 空气－玻璃界面损失的光。 那么，真