第三章 生物材料的预处理和液固分离要点.pptVIP

? 处理量 规模及成本 ? 高压匀浆和珠磨机处理量大，速度快，适用于工业生产 ? 产物对破碎条件（温度、化学试剂、酶等）的敏感性以及产 物在细胞中的位置 ? 生化物质的稳定性 ? 细胞的数量和细胞壁的强度 ? 破碎效果和产物释放率 ? 提取分离的难易 五 破碎方法的选择依据 总之，适宜的细胞破碎条件应该从高的 产物释放率 、 低的能耗 和 便于后续提取 这三方面进行权衡 韩国韩士生科 (Hans) 生物材料 MM301 型细胞破碎仪 离心式液固分离机 第三章 生物材料的预处理和液固分离 第一节 生物材料的预处理 第二节 细胞破碎 第三节 液－固分离 生物活性 物质来源 动物 植物 微生物 组织、器官、 细胞及代谢 产物 存在方式： 胞内和胞外 第一节 生物材料的预处理 一 确定预处理方法的依据 1 生物活性物质存在方式与特点 生物活性物质存在部位与它的生物活性密切相关 生物活性物质来源、存在状态 “胞内” 、“胞外”、前体 生物材料中的化学组成十分复杂 生物活性物质在生物材料中含量较低，杂质含量高，而且生理活性愈高的成分， 含量往往愈低 如胰岛素在胰脏中的含量为 0.02% ，胆汁中胆红素含量为 0.05~0.08% 生物活性物质的存在方式与其生物功能密切相关，一般情况下， 可以根据活性物质的生物功能推断其存在部位和分布方式 可被材料中酶、微生物破坏，还可能受酸、碱、盐、重金 属离子、机械搅拌、温度、甚至空气和光线作用改变活性 2 后续工艺要求 3 目的物稳定性 经过预处理和固－液分离后，一般要求得到滤液澄清、 pH 适中、 有一定浓度的目的生物活性物质 如后续采用离子交换方法处理，则对滤液中无机离子、灰分含 量、澄清度方面要求较高； 如采用溶剂萃取，则要求蛋白质含量较低，以减轻乳化现象； 如采用结晶方法，则还需要经过脱色处理 绞肉机 ? 将事先切成小块的组织绞碎 ? 形成组织糜 ? 许多蛋白和 酶可以从颗粒较粗的组织糜中提取出来 一般情况下：先用粗孔径的绞，再用细孔径的绞，有时可能还需 要多次进行 用绞肉机，一般细胞并不破碎，一些胞内产物不能有 效地提取，须通过特殊的匀浆才行 实验室常用玻璃匀浆器和组织捣碎器，工业上可用高 压匀浆器 二 动物材料的预处理 （一） 预处理的目的 三 发酵液（细胞培养液）的预处理 2 去除发酵液（培养液）中部分杂质以利于后续各步操作 1 改变发酵液（培养液）的物理性质，以利于固 - 液分离 主要方法有：加热、凝聚与絮凝、使用助滤剂 培养液中主要含有 2 类物质： 可溶性胶状物质 无机盐类 可溶性胶状物质： 核酸、杂蛋白、不溶性多糖，这些杂质不 仅使培养液粘度增加，液固分离速度受影 响，而且还会影响后续的分离纯化操作 无机盐类： 不仅影响成品质量，而且在采用离子交换法提取 时，由于树脂大量吸附无机离子而减少对目的物的 交换 加热是最简单和经济的预处理方法，即把发酵液（培养液）加 热到所需温度并保温适当时间。加热能使杂蛋白变性凝固，从 而降低发酵液（培养液）的粘度，使固液分离变得容易。 但加 热的方法只适合对热稳定的生物活性物质 （二） 细胞及蛋白质的处理 1 变性沉淀 蛋白变性的其它方法： 大幅度改变 pH ，加有机溶剂 （丙酮、 乙醇等） 、重金属盐 （如 Ag ＋ 、 Cu 2 ＋ 、 Pb 2 ＋ 等） 和表面活 性剂 天然蛋白质分子受到某些物理的或化学的因素影响时生物活性 丧失、溶解度降低、不对称性增高以及其他的一些物理化学常 数发生变化，这个过程就称为 变性作用 2 凝聚和絮凝 凝聚 和 絮凝 预处理对象 细小菌体或细胞（分泌胞外产物）、细胞的碎片以及蛋白质等 胶体粒子的去除 培养中的细胞、菌体或蛋白质等胶体颗粒的表面一般都带有电 荷，带电原因很多，主要是 吸附溶液中的