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分析测试中心 陈晓丽 2013.10.25 分析方法验证 一、概述 1 、分析方法验证的定义： 分析方法验证是证明一个分析方法适合于特定产 品的某种分析需要的过程。 2 、验证的目的： 为了得到准确、精密、可靠的数据。 分析方法验证 3 、分析方法验证相关的常用指导原则 ? 各国药典附录： 如 USP 〈 1225 〉方法验证，中国药典 2010 年版二部附录 XIX A 药品质量标准分析方法 验证指导原则。 ? FDA ：分析方法验证指南 ? SFDA ：化学药物质量控制分析方法验证技术 指导原则 ? ICH ： Q2 （ R1 ）分析方法验证 4 、适用范围： ? 新建立的分析方法； ? 分析方法出现变更时； ? 采用药典及其它法定标准未收载的分析方法； ? 药品生产工艺变更，可能引入新的杂质时。 5 、不适用范围： 对于仅需按照实验室日常测试操作步骤即可测 定的分析项目不需要进行验证，如外观、崩解时 限、密度、重量、 pH 值、干燥失重、灰分、装量 等等。 二、分析方法验证过程 1 、准备工作： ? 人： 有可以运用该分析方法，经过培训的人员。 ? 仪器： 有符合要求的、经过校准的、稳定的仪器。 ? 验证方案： 有经过批准的该待验证分析方法的验证方案， 其中有明确的职责规定，对于每一个步骤都有详 细的描述，对于每一个验证项目都有明确的可接 受标准等等 ? 样品 有质量合格的样品，经过准用的合适的各种对照 品。（包括工作对照品、各杂质对照品） 2 、严格按照批准的验证方案进行验证工作。如 出现异常或需进行适当调整时，应先经过批准。 3 、验证结束后： 对所得图谱和数据进行分析评价； 得出验证结论，出具验证报告。 三、分析方法验证的内容 ? 根据不同的分析方法的特性及用途确定不同的 验证项目和内容。 下表所列是通常情况下不同类型分析方法应该 进行验证的项目： 1 、专属性 ? 专属性是指在其他成分（如杂质、降解物、辅 料等）可能存在的情况下，采用的分析方法能 够正确鉴定、检出被分析物质的特性。 ? 一般方法都应该证明它的专属性。如果一个方 法的专属性不强，应该用其它方法进行补充。 ? 证明专属性的方式有 3 种： （ 1 ）在杂质可以得到的情况下，向样品中加入 一定量的杂质，证明杂质与样品能够得到分 离和检出。 （ 2 ）将样品用强光照射，高温，高湿，酸、碱 水解及氧化的方法进行破坏，比较破坏前后 检出的杂质个数和量。 （ 3 ）在杂质或降解产物不能获得的情况下，可 以通过与另一种已证明合理但分离或检测原 理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果 比较来确定。 2 、系统精密度 ? 系统精密度是指同一个样品溶液在连续进样的 情况下获得的结果之间的接近程度。 ? 目的：证明在该分析方法的运用上当天仪器的 性能。 （这也常是系统适应性的要求之一） ? 一般情况下，本项验证采用的样品溶液会是 100% 的杂质加标样品溶液。 ? 采用连续进样 6 针后得到的各杂质及样品的峰 面积的 RSD 作为评价标准。 3 、方法精密度 ? 方法精密度是指在同样的操作条件下，在较短 的时间间隔内，对同一批样品，由同一分析人员 称取数份样品，平行测定所得结果之间的接近程 度。 ? 证明方法精密度的方式有两种： （ 1 ）制备 6 份 100 ％浓度的试样，用各自测得的 结果进行评价； （ 2 ）制备 3 个不同浓度的试样，用各测定 3 次的 结果进行评价 。 ? 我们常用的是第 1 种方式。 ? 对测得的各份结果用 RSD 来评价。杂质一般可 接受标准为 ≤ 10.0% ，含量一般可接受标准为 ≤ 2.0% （基本上和系统适应性中要求一致） 4 、中间精密度 ? 中间精密度是指在同一实验室，由于实验室内 部条件改变时测定结果的接近程度。 ? 验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析 人员、设备。 ? 中间精密度的验证方式及评价标准和方法精密 度完全相同。 ? 方法精密度和中间精密度的结果之间也要有一 个评价标准： （ 1 ）各自测得结果之间的绝对差值应符合要求， 比如 : 含量差值 ≤ 1.0% ，杂质差值 ≤ 0.05% ，残留溶 剂差值 ≤ （浓度的 25% ）等。 （ 2 ）所有结果的 RSD 应符合要求（与方法精密 度的要求基本一致）。 5 、检测限和定量限 ? 检测限是指样品中的被分析物能够被检测到的 最低量，但不一定要准确定量。检测限是为了考 察分析方法是否具备灵敏的检测能力。 ? 定量限是指样品中的被分析物能够被定量测定 的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精 密度。定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定 量检测能力。 ? 当用 GC 和 HPLC 法时 ，一般以信噪比为 3 ： 1 时的相应浓度作为检测限，以信噪比为 10 ：