临床常见细菌的手工鉴定和结果判断.pdfVIP

. 临床常见细菌的手工鉴定和结果判断 一．细菌的鉴定步骤 1、鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有 已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。 2 、对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板 上生长良好， 有单个菌落可以进行生化试验。 （我们这里一般都 是预先纯化培养） + – – + 3、对待鉴定的菌种进行革兰染色， 观察形态 （Gc ，G b，G c ，Gb）， 做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。要注意对待 鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统， 临床常见细菌的快速简单 的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。 4 、按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型， 标本编号， 送检日期等。 另外最重要的是要填写好该菌种的菌落 形态以及有无溶血。 5、复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。 ⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色 方法。 首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变 细菌对染料的通透性）。 第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ） 第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ） 第三步：用 95%乙醇脱色（染色液Ⅲ） . . 第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ） 2 2 ⑵．触酶实验 (H O 实验 ) ： a. 原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初 生态氧，继而形成氧分子出现气泡。 b. 方法：一般用玻片法， 就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开， 滴加 3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳 性，不产生气泡者为阴性）。要注意不能在血平板上进行实验， 这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假 阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。 c. 阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要 避光置 4 ℃冰箱保存。 d. 应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实 验阳性，链球菌属阴性。临床常见细菌鉴定实验中我们一般用 于区别葡萄球菌属（ +），微球菌属（ +），链球菌属（－）。 ⑶．氧化酶实验（ Kovac 实验）： a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统 的最终呼吸酶。 酶并不直接与试剂 （1%盐酸四甲基对苯二 胺）起反应， 而是首先使细胞色素 c 氧化，然后氧化型细 胞色素 c 使对苯二胺氧化，出现深兰色反应。 b. 方法（滤纸法，菌落法，试剂纸片法）： 一般我们采用滤纸法， 取白色洁净滤纸条， 沾取菌落少许， 加试剂一滴， 阳性者立即呈粉红色， 继而出现深兰色。 结 . . 果读取在 10 秒钟时为最佳， 60 秒内读取可靠。本实验避 免接触含铁物质 （假阳性），也不能在含糖培养基上生长 的菌落进行实验（假阴性）。 c. 阳性对照用铜绿假单胞菌，阴性对照用大肠埃希菌。 d. 应用：奈瑟氏属的菌种均阳性