硝酸还原酶活性的测定.pptVIP

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2020-05-21 发布于湖北
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硝酸还原酶活性的测定.ppt

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* * 实验三硝酸还原酶活性的测定（活体法）【实验原理】硝酸还原酶（NR）是植物氮素代谢作用中的关键性的酶，该酶为诱导酶。本身不存在该酶，外加NO3-，诱导生成 NO3 - NR NO2 - 可以从细胞中很快地分泌到反应液中，故只要测定反应液中的的增加，可计算该酶活性的大小。 NO2 - NO2 - 磺胺比色法磺胺＋酸性重氮盐＋ α- 萘胺紫红色偶氮染料（颜色在2～3小时内稳定）比色测定，得到的含量 NO2 - NO2 - 【实验步骤】 1. 样品处理叶片水洗吸干 ⑴ 钻孔得小圆片（直径1cm）称取2份，每份0.4g ⑵ 取2只三角瓶 NO.1: 磷酸缓冲液 5ml ＋蒸馏水 5ml NO.2: 磷酸缓冲液 5ml ＋0.2M KNO3 5ml ⑶ 加入叶片 ⑷ 抽气至叶片沉淀（抽气彻底，以使溶液与质膜充分接触，使反应顺利进行） ⑸ 30℃避光保温30min 2. 含量测定 NO2 - 搅匀，静置30min 反应液1ml 磺胺试剂2ml α- 萘胺2ml 比色A520 3. 计算反应时间（0.5hr）×样品重量（g） C×反应液总体积（10ml）＝ ug / g·FW·h 4. 标准曲线绘制配制 5，4，3，2，1，0.5，0ug/ml NaNO2