应用药物基因组学研究硫嘌呤类药物的个体化治疗 PPT课件.ppt

进行个体化治疗的必要性 收集治疗中发生不良反应病例(观察组)。 收集治疗中无发生不良反应病例(对照组)。 比较对照组和研究组TPMT表型和基因型特征 硫嘌呤类药物的个体化治疗 个体化治疗指标的确立 个体化治疗方案的探索 个体化治疗指标的确立 检测TPMT表型、基因型，监测硫嘌呤类药物治疗中，TGNs的变化及白细胞数和不良反应情况。  参考TPMT基因型结果，在TPMT活性和TGNs监测下，进行硫嘌呤类药物个体化治疗的尝试。 个体化治疗尝试 *  应用药物基因组学 研究硫嘌呤类药物的个体化治疗 主要内容 1药物遗传基因组学简介 2硫嘌呤类药物个体化治疗 个体化治疗 新的医学模式:个体化治疗 （Personalized Therapy），根据分子诊断提出治疗方案 诊断 分子诊断-预测反应 治疗 理想反应 打破试误医学的循环 个体化治疗临床服务 增加剂量 减少剂量 换药 临床诊断 医学检测所 遗传变异 分子诊断 方案建议 分子诊断书 临床医生优化治疗方案 药物作用受药物代谢、转运、靶点多态性控制 药代动力学 药效动力学 药物疗效和毒性的个体差异 基因组 基因变异 (单核苷酸多态性) 药物靶点 药物转运体 药物代谢酶 硫嘌呤类药物个体化治疗的研究基础 硫嘌呤类药物 ６－巯基嘌呤 (6－MP) 6-硫鸟嘌呤 （６－TG) 硫唑嘌呤 （AZA 其他 硫嘌呤类药物临床运用 淋巴细胞白血病 风湿病 自身免疫性肝炎 器官移植 炎性肠病 克隆氏病 硫嘌呤类药物的代谢过程 AZA 6-MP TGNs TIMP TPMT SAM 6-MMP Thiouric acid xo 硫嘌呤甲基转移酶存在遗传多态性和种族差别 TPMT在白种人呈三态分布（88.7%,11%,0.3%) TPMT在美国黑人呈二态分布． 硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)的活性与硫嘌呤类药物的疗效、毒副作用密切相关. TPMT酶活性低下而造成的药物毒副作用可导致死亡； TPMT酶活性较高则硫嘌呤类药物用量不足又会使疾病复发 研究的主要内容 患者TPMT遗传多态性特征 硫嘌呤类药物的个体化治疗 硫嘌呤甲基转移酶多态 性分析方法 TPMT 测定红细胞内 TPMT活性 分子生物学方法 筛查突变 其他方法 放射化学 高效液相色谱法 PCR-RFLP PCR-SSCP DHPLC 测序,ASPCR 等 TPMT活性分布多态性研究 方法 1． 样本处理 2 ．孵化 3 ．提取 4．测定 测定 HPLC进样分析 流动相:水:甲醇:三乙胺(76.8:23:0.2) 流速:1.0ml/min 紫外检测波长:290nm TPMT基因多态性研究  实验方法 1.外周血DNA提取 2. TPMT基因型的检测 基因型检测 DNA(40ulTE溶解,-20℃保存至处理) ASPCR PCR--RFLP TPMT*2 TPMT*3A TPMT*3B TPMT*3C TPMT*1 引物序列及PCR反应参数 外显子 引物名称 引物序列 产物长度 解链温度 5 P2W 5’-GTATGATTTTATGCAGGTTTG-3’ 254 58 P2M 5’-GTATGATTTTATGCAGGTTTC-3’ 254 58 P2C 5’-TAAATAGGAACCATCGGACAC-3’ 7 P460F 5’-GGGACGCTGCTCATCTTCT -3’ 338 61 P460R 5’-GCCTTACACCCAGGTCTCTG -3’ 10 P719F 5’-AA