美牛生物的微球使用说明书(300nm）.pdf

时间分辨荧光微球说明书 一、产品简介 本产品是针对免疫层析检测(lateral flow immunoassay)试剂设计，采用时间分 辨荧光染料与苯乙烯共聚而成。具有stokes 位移大、聚集时不会发生内淬灭效应、 检测信号强、荧光染料包在微球里面，不易受外界环境影响、荧光稳定等特点， 是免疫荧光定量层析理想的标记物。 二、微球参数 1、成分：稀土元素铕的荧光配合物修饰的改性聚苯乙烯微球 2 、固含：1% （1ml 悬浮液中含有10mg 微球） 3、平均粒径：300nm 4 、粒径均一性：CV5% 5、官能团：羧基、硫酸基等 6、羧基含量：300 ±20 μmol/g 7、荧光性能：激发波长365nm，发射波长：610nm 8、荧光寿命：720 μs 9、密度：1.05g/cm3 10、折射率：1.59 （589nm ，25 ℃） 11、外观：白色乳液 三：微球保存 保存条件：2-8℃避光、密封保存，不能反复冻融。 四、使用方法 （一）活化步骤： 1、超声分散微球，约2min ，然后手工摇匀； 2 、在2mL 的EP 管中，加入100 μL 微球 （固含1%），再加超纯水 （或MES 缓冲液）900 μL ，待用； 3、配制： 10mg/ml N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 乙醇溶液 A 液 10mg/ml 1-(3-二甲氨基丙基)-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC) 乙醇溶液 B 液 注意：NHS 、EDC 均易吸潮，称量前这两种试剂需复温30min 以上。 4 、在微球悬液中加入5 μl 的A 液、混匀，再加入5 μl 的B 液、再次混匀，室温反应15～ 30min ； 5、12000r/min ，离心15min ，去上清，加入1ml 超纯水 （或抗体偶连缓冲液），然后超声分 散均匀。 注意：一定要彻底分散，否则交联抗体后的微球极易团聚，跑条带很差。 （二）抗体交联 特别注意交联所用的抗体是否产生沉淀，如果产生沉淀则需对抗体进行离心或者过滤处理，否则将导 致交联后的微球发生团聚。过滤处理或者离心处理的抗体需要重新测定抗体浓度。 微球表面交联抗体的量为：抗体/微球= 10～50 μg/mg，最佳标记量一般为20 μg/mg 。 抗体交联步骤： 1、取上述1ml 活化后的微球悬液，超声分散，边搅拌边滴加抗体，优选的抗体用量为20ug ； 注意：抗体交联缓冲液推荐是硼酸缓冲液,0.02mol/L,pH=8.0。每株抗体都有其最佳的交联缓冲液（种类、 浓度、pH ），需自行摸索。 2 、在室温下混匀1 小时，然后检测偶联抗体后微球的性能； 注意：可用羊抗鼠IgG 包被的试条检测抗体交联后微球的流动性、抗体识别性能等。 3、加BSA( 终浓度在0.5%)进行封闭 1 小时； 4 、10000r/min 离心15min ； 5、取1ml 保存液加入到离心后的微球中，混匀，冷藏避光保存，待用。 注意：因各项目的抗体不同，最佳保存液需自行摸索。基础保存液配方为：10%蔗糖 （w/v ）、0.01mol/L PB pH=7.4 。