第三章 紫外可见分光光度法.ppt

（二）单色器 3、狭缝 狭缝宽度直接影响单色光的纯度。 狭缝过宽，单色光不纯；狭缝过窄，光通量过小，灵敏度降低。 定性分析宜采用较小的狭缝宽度。 定量分析宜采用较大的狭缝宽度。 （二）单色器 4、杂散光及其消除 杂散光：指出射光束中混有的与仪器所指示的波长相差较大的光波。 杂散光会严重影响吸光度测定。 杂散光产生的原因：各光学部件和单色器的外壳内壁的反射；大气或化学部件表面尘埃的散射；光学元件霉变、腐蚀。 可将单色器用罩壳封闭起来，罩壳内涂有黑体以吸收杂散光。 即比色皿，用于盛放待测溶液的容器。 1、光学玻璃吸收池 可见光区 2、熔融石英吸收池 可见光区、紫外光区 用于盛放供试液和参比液的比色皿，应厚度相同，两只比色皿的透光率之差小于0.5%。 （三）吸收池 将光信号转变成电信号的光电转换元件，其产生的电信号与照射光强度成正比。 要求： 在测量范围内具有高灵敏度； 对辐射能量的响应快、线性关系好、线性范围宽； 对不同波长的辐射影响性能相同且可靠； 稳定性好，噪声水平低。 （四）检测器 1、光电池 2、光电管 3、光电倍增管 4、光二极管阵列检测器 （四）检测器 1、光电池 硒光电池：敏感光区300~800nm，易疲劳，寿命短。 硅光电池：紫外光区及可见光区。 （四）检测器 2、光电管 以一弯成半圆柱形的金属片为阴极，阴极内表面镀有碱金属或碱金属氧化物等光敏层； 在圆柱形的中心置一金属丝为阳极，可接受阴极释放的电子。 两电极密封于玻璃管或石英管内并抽真空。 红敏光电管(镀有银和氧化铯)可用于625~1000nm波长。 蓝敏光电管(镀有锑和铯)可用于200~625nm波长。 光电管灵敏度高，光敏范围宽，不易疲劳。 （四）检测器 光电管检测器示意图 3、光电倍增管 一种加上多级倍增电极的光电管。 外壳由玻璃或石英制成，阴极表面涂有光敏物质，在阴极与阳极之间装有一系列次级电子发射极，即电子倍增极。 辐射光子撞击阴极时发射光电子，该电子被电场加速并撞击第一倍增极，撞出更多电子，依次进行，最后阳极收集到的电子数是阴极发射电子的105~106倍。 （四）检测器 光电倍增管示意图 光电管输出的电信号很弱，需经过放大才能以某种方式将测量结果显示出来，一般的分光光度计多具有荧屏显示、结果打印及吸收曲线扫描等功能。 现代的分光光度计装备有计算机光谱工作站，可对数字信号进行采集、处理与显示，并对各系统进行自动控制。 （五）信号处理和显示系统 1、单光束分光光度计 2、双光束分光光度计 3、双波长分光光度计 4、全波长分光光度计 二、分光光度计的类型 在单光束光学系统中，单色器色散后的单色光进入吸收池。 经单色器分光后形成一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。 这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。 （一）单光束分光光度计 光源发出光经单色器分光后，经旋转扇面镜（切光器）分为强度相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池，光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度，并作为波长函数记录下来。 双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。 由于两束光同时分别通过参比池和样品池，因而能自动消除光源强度变化所引起的误差。 （二）双光束分光光度计 由同一光源发出的光被分为两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长的单色光。 利用切光器使两束光以一定频率交替照射同一吸收池，然后测定两个波长处的吸光度差值ΔA。 ΔA= Aλ1－ Aλ2=(ε1－ ε2)lc （三）双波长分光光度计 优点： 双波长分光光度计只利用1个吸收池，消除了吸收池及参比池所引起的测量误差； 用同一光源得到两束光，可减小因光源电压变化产生的影响。 （三）双波长分光光度计 光电二极管阵列（PDA）是在晶体硅上紧密排列一系列光电二极管检测管，光经全息光栅表面色散并透射到二极管阵列检测器上，被其中的光二极管接受。 二极管输出的电信号强度与光强度成正比。 两个二极管中心距离的波长单位称为采样间隔。 二极管数目越多，分辨率越高。 （四）全波长分光光度计 全波长分光光度计同时检测透过样品复色光。 它具有灵敏度高、噪音低、线性范围宽等优点，可用作高效液相色谱检测器。 （四）全波长分光光度计 （一）光学性能 1、辐射波长 2、仪器的测量范围 3、仪器的重复性及准确度 4、杂散光 三、光学性能与仪器校正 1、辐射波长 (1)波长范围：指仪器所能测量的波长范围，通常为200~800nm。 (2)光谱带宽：指在最大透光强度一半处曲线的宽度，通常为6nm以下。 (3)波长准确度：仪器所显示的波长数值与单色光的实际波长值之间的误差，规定紫外光区≤±1nm，500nm附近≤±2n