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EV71 疫苗质量控制和评价技术要点 2016年 11月 16日发布 引言 手足口病（ Hand-foot-mouth disease, HFMD ）是婴幼儿人群常见的急性传染 病，主要表现为发热和手、足和口等部位的皮疹或疱疹，可并发无菌性脑膜炎、 脑炎及急性弛缓性麻痹等中枢神经系统症状， 甚至死亡。多种肠道病毒感染可引 起 HFMD ，肠道病毒 71 型（ EV71）和柯萨奇病毒 A 组 16 型（CA16）为引起世 界范围内 HFMD 爆发的主要病原体（ 1）。 HFMD 中约 90%的死亡病例由 EV71 感染引起（ 2）， EV71 引起的 HFMD 已成为我国的重大公共卫生问题之一。 20 15 年，我国自主研发的 EV71 灭活疫苗获批上市（ 3）。研究制定 EV71 疫苗质 量控制和评价技术技术要点， 对规范并提高我国 EV71 疫苗的质控标准和生产一 致性，保证上市疫苗安全、有效和质量可控具有重要意义。 本技术要点中 EV71 疫苗是指采用传代细胞生产的全病毒灭活疫苗，或采用 重组 DNA 技术将具有免疫保护性的抗原基因克隆到表达载体上，转化相应的宿 主中表达的 EV71 抗原蛋白，经过纯化等工艺制备的 EV71 疫苗。 本技术要点中凡涉及生物制品质量控制的通用要求，均应按现行版《中华人 民共和国药典》三部有关规定执行（ 4）；有关生产设施的要求应参照国家食品 药品监督管理总局（ CFDA ）2010 版《药品生产质量管理规范》执行（ 5）。 本技术要点仅为对 EV71 疫苗进行质控和评价技术要求的指导性文件，需根 据技术的发展和实际需要进行适当的更新。 一般考虑 EV71 属于小 RNA 病毒科，肠道病毒属，为无包膜病毒。 EV71 颗粒为 20 面 体的对称结构，直径约 24-30 纳米，由 60 个亚单位组成。病毒基因组为单股正 RNA ，7400 核苷酸左右，包含有 5’-UTR 区和 3’-PolyA 尾。 EV71 的衣壳蛋白主要由 VP1、 VP2、VP3 和 VP4 组成，其中， VP1、 VP2 和 VP3 位于病毒衣壳外部， VP4 位于病毒衣壳内部。 VP1 是 EV71 主要的抗原表位。 EV71 只有一个血清型，依据 VP1 区序列可分为 A 、B 和 C 3 个基因型以及 11 个基因亚型。我国台湾、香港以及其他国家或地区近年来流行的主要基因型包括 B4、B5、C2、 C4 和 C5 等亚型（ 6），我国大陆流行的 EV71 主要为 C4 亚型。 5 岁以下儿童和 婴幼儿为 EV71 易感人群（ 7）。在后脊髓灰质炎时代， EV71 已成为对人类健康 危害最大的肠道病毒（ 8）。 多个国家或地区的企业和研究机构开展了 EV71 疫苗的研发，疫苗种类包括 全病毒灭活疫苗、基因工程重组蛋白疫苗、减毒活疫苗和多肽疫苗等（ 9）。其 中，我国 3 家企业研发的 EV71 全病毒灭活疫苗对 EV71 感染所致 HFMD 的保护 效果分别为 97.4%， 94.7%和 90.0%（ 10-12）。 2015 年 12 月， CFDA 批准中国 医学科学院医学生物学研究所和北京科兴生物制品有限公司生产的 EV71 全病毒 灭活疫苗上市（ 3），为我国及世界范围控制 EV71 感染相关的疾病，特别是严 重 HFMD 的爆发和流行提供了手段。 近年来 HFMD 流行病原谱发生改变，柯萨奇病毒 A 组 6 型、A 组 10 型病毒 感染引起 HFMD 的流行呈增长趋势， 提出了研发防控 HMFD 多价疫苗的需求（1 3,14）。基因工程重组蛋白疫苗中的病毒样颗粒（ VLP ）疫苗具有易工业化规模 生产的优势，且在动物试验上显示良好的保护效果，显示了研发 EV71 VLP 疫 苗的可行性（ 15,16）。 本技术要点重点关注 EV71 疫苗生产的质控和评价， 强调生产过程的一致性， 同时对研发阶段的疫苗也提出相关标准和要求， 以保证研发和生产阶段中疫苗质 控和评价方法及标准的衔接。 临床前质控和评价 应依据世界卫生组织 （WHO ）相关文件以及 CFDA《预防用疫苗临床前研究 技术技术要点》等技术文件进行 EV71 疫苗临床前质控和评价研究（ 17-19）。 新研发疫苗的质量标准整体上应达到或高于上市疫苗的标准， 动物保护试验中疫 苗免疫诱导的中和抗体水平和保护效果应与上市疫苗具有可比性。 1.1 灭活疫苗毒株和细胞基质 疫苗生产用毒株的筛选和确定是灭活疫苗研发成功的关键。应选择主要流行 基因型的毒株（目前我国为 C4 型）作为疫苗候选株进行筛选，重点关注不同毒 株的交叉保护能力和遗传稳定性。采用目前世界范围流行的毒株（ B4、B5、C2、 C4 和 C5 等）及国内不同地区的流行