solexa测序技术原理介绍20120715.docVIP

测序技术原理及流程 北京百迈客生物科技有限公司 Why Sequencing？ ? 认识DNA序列 ? 从根源上寻找导致蛋白功能差别的位点 ? 为物种鉴定、临床诊断和司法鉴定提供基 础 ? 疾病预测 ? 研究基因间的相互作用 ? 揭示物种进化的历程 ? 生命之树 一代 测序 二代 测序 DNA测序需要解决的基本问题 ? 如何读到DNA片段的碱基信号？ –通过扩增来增加DNA的数量来放大信号 –有足够多的DNA合成反应中止于同一个碱基 ? 如何读到DNA片段的连续碱基信号？ –让合成反应的中止依次出现在每个碱基上 ? 如何读到一批DNA片段的连续碱基信号？ –在不同模板的反应间建立有效的隔离方式 Contents ? Sanger 测序技术原理 ? Solexa（Illumina GA/HiSeq） 测序技术原理 ? 454 测序技术原理 ? SOLiD 测序技术原理 ? 四种测序方法比较 the first-generation sequencing technology Sanger法测序原理 Sanger测序技术 ?PCR末端终止技术+电泳检测技术 ?单个片段序列测定 ?最高通量：小于4MB/天 基于平板胶的测序技术 96通道毛细管阵列 双脱氧终止法测序反应原理 ? 原理： –原料：DNA聚合酶、DNA模板、单链寡核苷酸引物、 4种dNTP及 4种ddNTP的测序反应体系 脱氧