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长期施肥对土壤微生物量碳的影响研究
宋健
土壤微生物量是植物营养物质的源和库,并积极参加养分循环,代表土壤
养分的活性部分,因此常被用于评价土壤质量的生物学性状。土壤呼吸和微生
物代谢商综合了微生物量的大小和活性,可以较好地反映土壤环境质量的变化。
基本的土壤质量或健康生物指标应当包括微生物碳、氮,潜在矿化氮,土壤呼
吸,微生物商等。微生物量,土壤呼吸及其衍生指数,一些土壤功能微生物、
土壤酶等均可看做目前具有潜力的生物学指标。许多研究表明,土壤微生物量、
土壤呼吸及其衍生指数较其他土壤性质能够迅速地响应施肥管理(有机肥和无机
肥)、作物体系、耕作和体闲以及土地利用方式的差异。在施肥管理方面的研究
表明,施用有机肥可以显著提高土壤微生物量碳、氮的含量及基础呼吸强度,
其中随着有机肥施用量的增加,土壤微生物量碳、氮的增加越明显。施用无机
肥对于土壤呼吸没有显著影响,但是由于气候条件、土壤类型以及耕作施肥的
复杂多样性,其对土壤微生物量的影响不尽相同。李娟等报道,灌溉褐潮土上
配合施用氮、磷、钾肥较不施肥土壤显著增加土壤微生物量碳、氮,而旱作褐
土上适量施用氮磷无机肥与不施肥相比,土壤微生物量碳、氮没有显著差异
目前,测定微生物量碳最常用的方法是氯仿薰蒸浸提法,它最大的优点是简单
快速,可应用于淹水土壤的微生物量测定,并且可以与同位素技术结合,研究
土壤和环境的物质循环及转化 。
一、采样与样品预处理
土壤样品的采集方法和要求与测定其它土壤性质时没有本质区别。采集到
的新鲜土壤样品立即去除植物残体、根系和可见的土壤动物(如蚯蚓)等,然后迅
速过筛(2~3 mm),或放在低温下(2~4 ℃)保存。如果土壤太湿无法过筛,进行
晾干时,必须经常翻动土壤,避免局部风干导致微生物死亡。过筛的土壤样品
调节到田间持水量的 50%左右,在室温下于密闭装置中预培养 1 周,密闭容器
中要放入两个50mL 的烧杯,分别加入水和稀 NaOH,以保持其湿度和吸收释放
的 CO2 。预培养后的土壤最好立即分析,若需要放置一段时间,在低温下
(2~4 ℃)最好不要超过 10d。
土壤田间持水量采用改进的 Shaw (1958)方法测定。在漏斗下端连接一带
夹子的橡胶管,漏斗用玻璃纤维堵塞。取 50.00 g 土壤于漏斗中,夹紧橡胶管,
加入 50 ml 水,保持 30 min,再打开夹子使多余的水流入量筒,30 min 后测定
流出的水量,同时测定土壤湿度,计算土壤田间持水量,用烘干土壤质量表示。
—林启美老师文件
二、方法—氯仿薰蒸浸提法(FE)
1、方法原理
土壤经氯仿薰蒸处理,微生物被杀死,细胞破裂后,细胞内容物释放到土
壤中,导致土壤中的可提取的碳大幅度增加。通过测定浸提液中全碳的含量可
以计算土壤微生物量碳。
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浸提液中碳可用重铬酸钾容量法测定,也可用微量碳分析仪测定。此处介
绍比较简单的重铬酸钾容量方法。
2、仪器及设备
培养箱;真空干燥器;真空泵;往复式振荡机 (速率 200rev/min);冰柜;
磷酸浴。
3、试剂
1.无乙醇氯仿:量取 500 mL 氯仿于 1000 mL 的分液漏斗中,加入 50mL 硫
酸溶液[(H2SO4)=5%],充分摇匀,弃除上层硫酸溶液,如此进行 3 次。再加
入 50 mL 去离子水,同上摇匀,弃去上部的水分,如此进行 5 次。得到纯氯仿
存放在棕色瓶中,并加入约 20g 无水 K2CO3,在冰箱的冷藏室中保存备用。
(试剂浓硫酸(H2SO4)=95~98% ,稀释 19 倍)
2.硫酸钾溶液[c(K2SO4)= 0.5 mol·L-1]: 称取硫酸钾(K2SO4,化学纯)
87.10g,加热溶于去离子水中,稀释至 1L。(需加热溶解)
3.重铬酸钾[c(1/6K2Cr2O7)=0.2000 mol·L-1]: 称取经 130 摄氏度烘干
2~3h 的重铬酸钾(K2Cr
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