植病研究法―1全版.ppt

第五节 培养基与灭菌处理-灭菌 (二) 各种物品灭菌处理 1、玻璃器皿灭菌 玻璃器皿，多以干热灭菌，一般 160 ~ 170 °C处理 1 h；湿热灭菌，则为 121 °C，20 min，灭菌后应干燥使用。 2、培养基灭菌 培养基多以高压灭菌，指标为 121 °C、30 min 某些培养基成分在高温下易分解破坏，可间歇灭菌或加压处理(115 °C、10 min) 也可过滤或化学灭菌后再和灭菌的培养基混合 许多生物材料，如植物的枝、叶、残体等，经高温灭菌后性质会发生改变， 此类材料可用化学灭菌。 3、土壤灭菌 土壤比较难以灭菌。薄层土壤干燥灭菌要 165 °C，几个小时， 高压灭菌也需 121 °C，2 h。经过高温处理，土壤的理化性质也有改变，故可用间歇灭菌(每天 2 h，共 5 天) 土壤中的病原生物对高温抵抗力并不强，潮湿土壤 70 °C 灭菌 1 h，足以杀死其中的病原生物，故也可采用巴斯德灭菌 还可采用福尔马林、环氧丙烷等化学方法熏蒸灭菌。 实验室常用的刀剪等金属器械进行灭菌，可在 70%乙醇中浸后，经火焰灼烧灭菌。 * 第五节 培养基与灭菌处理-灭菌 (三) 灭菌效果检验 高压蒸汽灭菌效果：灭菌后的三角瓶、耐高温塑料瓶或斜面试管，在 25 ~ 30 °C下放 3 天左右，确定无菌后再用 无菌环境：将灭过菌的 PDA 斜面培养基(适于真菌生长)和牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基(适于细菌生长)各取两管放入灭菌场所，灭菌后从中各取一管打开，在空气中暴露 30 min，盖上试管盖，同对照管一起在 30 °C下培养，48 h 后检验有无菌落生长 * 第六节 植物病原物营养与培养特性 病原微生物的寄生性不同，所需的营养条件也各有差异。要研究病原微生物生长发育与致病性的关系，必须预先了解其营养要求和培养条件。 专性寄生物大多数只能寄生活体，则活的植物即是其培养基 而兼性寄生物可以通过人工培养，在死体物质上、人工养料上进行生活 * 第六节 植物病原物营养与培养特性-营养需求 (一) 碳源 碳源是微生物首要的营养来源，是构成其细胞组分的主要元素，能提供碳素以合成碳水化合物和氨基酸的骨架，同时又是重要的能量来源 微生物可利用的有机碳素化合物很多，其中以碳水化合物为最优，氨基酸和蛋白质等次之，油脂类最差，这主要与其分子的大小和可溶性程度有关 在各种碳水化合物中，单糖比多糖好，己糖又优于戊糖。实验室以葡萄糖应用范围最广，蔗糖也较常用。几乎所有真菌都能利用葡萄糖。 微生物对碳源的利用能力，往往随环境的改变而有变化 微生物对一种含碳化合物的利用程度，与培养基的理化性状、培养温度、两种或多种碳素化合物混合使用等条件有关。 * 第四节 植物病害标本采集与制作 植物病害的标本，是植物病害症状的最直观的实物记载，是识别和描述植物病害症状的基本依据，也是进行植物病理学工作最为直接和基础的试材。 对于具体的植物病害的研究，可在田间观察的基础上，在室内做进一步比较鉴定，从而做出准确的诊断、识别和鉴定，这对于掌握病害发生的种类和为害情况，深入研究发生规律，并据此有针对性地制定病害防治的综合措施，均具有重要意义。 植物病害标本采集工作包括采集、制作与保存。 * 一、植物病害标本采集 (一) 标本采集的注意事项 病状典型 病状是病害诊断的重要依据。一种病害在同一植物上可同时表现不同类型的症状，在植物生长发育的不同时期也可先后表现不同类型的症状。 采集病害标本，不仅采集某一发病部位的典型病状，还要采集不同时期、不同部位的病状标本，如稻瘟病，应采集苗瘟、叶瘟、节瘟、枝梗瘟、穗颈瘟、谷粒瘟等各个时期的典型病状，对叶瘟还应注意急性型、慢性型、白点型和褐点型等典型病状类型。 病征完整 为进一步鉴定病害，应注重标本的病征 细菌性病害往往有菌脓溢出； 真菌性病害在感病部位的各种霉状物、粒状物等的存在； 有转主寄主的锈病尽量采集到第二寄主标本； 病原真菌包括有性和无性两个阶段，应在不同时期分别采集； 有的真菌往往在枯死株上才产生病征，故应注意采集地面的枯枝落叶； 注意在病原有性阶段产生子实体的时期采集，如白粉病叶片上的粒状物，即为由病菌闭囊壳形成的病征。 避免混杂 记录全面 临时处理 * * 节瘟 * 穗颈瘟 * 一、植物病害标本采集 (二) 标本采集常用的工具 标本夹 用来夹压各种含水较少的枝叶标本，多为木板条制成，长 60 cm，宽 40 cm。 标本纸 用标本纸夹置标本，可较快吸收枝叶标本内的水分。标本纸应保持清洁干燥。采集箱多为铁皮制作，用于装纳采集的果实、木质根茎或怕压而在田间来不及制作的标本。 其他 刀、剪、锯等，小的玻璃瓶、玻璃管、塑料袋等，记录本、标签等。 * 二、植物病害标本制作 (一) 蜡叶标本的制作 将田间采集的新鲜病叶标本