动物分子遗传学教学幻灯片.ppt

Northern杂交和Western杂交 Northern杂交：提取生物总RNA或mRNA，变性电泳，转膜、用DNA杂交。 用途：测定基因表达的时空性。 Western杂交：蛋白质电泳后转移到尼龙膜上，用抗体结合。 用途：蛋白表达、蛋白活性等。 电镜观察 先进行杂交，在做电镜观察。 异源双链定位法（Heterduplex Mapping）：环形不配对的区域可能是缺失或插入片段。 R-环定位法（R—loop MaPPing）：标记的mRNA和待测DNA双链杂交，检测RNA位置。 用途：基因定位、内含子测定、缺失或插入片段的发现。 第三节、DNA二级结构 The double helix may assume alternative forms B型DNA 、A型DNA （ 右旋）；Z型DNA（左旋） 反向重复序列、DNA链的修饰 三链和四链DNA some DNA molecules are circular instead of linear Some viruses carry single –stranded DNA A B Z Handedness Pitch Base Inclination B型DNA（右旋） B型DNA（右旋）是Wateson和Crick提出DNA双螺旋结构模型，右手螺旋，每匝10个碱基对（溶液中10.5碱基对），在溶液中DNA一般为B型构象。 A-DNA（右旋） 当B-DNA脱水，或加入乙醇或盐使水的活性降低可转变为A-DNA。A-DNA使相邻磷酸基间的距离缩短0.1nm，每匝11个碱基，螺距为2.8nm，碱基对向大沟移动0.5nm。A-DNA主要是DNA与RNA杂合体及RNA双螺旋区的螺旋形式，或A-T丰富区。 Z-DNA（左旋） 当DNA链中连续出现鸟嘌呤和胞嘧啶二核苷酸d（CGCGCG）时，在这一区段内DNA形成Z型构象。 Z-DNA中碱基不是对称的位于螺旋轴附近而向边缘延伸，使得大沟变浅，小沟变深变窄。 在溶液中，盐离子浓度低时d（CGCGCG）以B-DNA存在，在高盐离子浓度时以Z-DNA存在。胞嘧啶甲基化可使B-DNA转变为Z-DNA。 A -DNA B -DNA Z-DNA Bp/圈 11 10.4 12 旋转/bp +34.7° +34.6° -30.0° 上升nm /bp 0.256 0.338 0.571 上升nm /圈 2.8 3.4 6.9 螺旋直径nm 0.23 0.19 0.18 Structural Variation Defined by Bases normal frequent never Never (except in intercalation) Common Common Propeller Twist Buckle Real Life Sugar “Pucker” Conformations A DNA B DNA B DNA Major Minor Z DNA Major Minor A DNA Major Minor A B Z Mi Ma Ma Mi Mi Ma Rotation About the N-Glycosidic Bond N3 A,B DNA Z DNA (G only) A A B Z Z-DNA Phosphate Backbone is Kinked 反向重复序列 发针结构hairpin（茎环结构stem-loop） 十字型结构cruciform 发针结构hairpin 当一条链上的一段序列与另一段序列互补且相离不远时，单链就会自动折叠回来，形成了局部的双链区，叫做茎（stem），茎的一端由不互补的序列形成一个环（loop），这种结构叫做发针（hairpin），或茎环（stem－loop）。 5’-GCTTTT……AAAAGC -3’ 反向重复序列 如果双链DNA含有结构，如： 5’-GCTTTT……AAAAGC -3’ CGAAAA……TTTTCG 这段序列无论从哪个方向阅读，两条链的序列都 是相同的。也就是形成了一个序列的两个拷贝， 两个拷贝处于相反的方向，这样的两个拷贝叫做 反向重复序列（inverted repeats）。 DNA是双链 碱基在内： 形成氢键 避免与水接触 糖-磷酸在外： 与碱性蛋白质结合 DNA s