传统方法在临床细菌学鉴定中应用 课件.pptVIP

传统方法在临床细菌 学鉴定中的应用 微生物分析仪的使用加强了传统细菌学鉴定 的薄弱环节，同时通过细菌形态、染色性等确认， 保证了仪器鉴定的准确性。近年来，随着检验医 学的发展，临床细菌学检验日益受到重视，我们 应充分发挥传统方法和先进仪器的优势，促进临 床细菌学检验技术的进一步提高。 1 、分离培养是临床细菌学不可缺少的 基本技术，是获得纯培养物（纯菌）的必 要手段，即使自动化仪器再先进也只能对 纯菌做出鉴定。 2 、对细菌生长繁殖特性的观察：需 氧菌、兼性厌氧菌和厌氧菌通过常规培养 方法容易区别，否则容易把兼性厌氧菌当 厌氧菌鉴定。 细菌对营养要求，温度、酸碱度、 耐盐性等也是鉴定的依据：如奈瑟菌属的 细菌形态相似，但淋球菌和脑膜炎奈瑟菌 只能在营养丰富的血琼脂或巧克力琼脂上 才能生长，而其它奈瑟菌可在营养琼脂上 生长；葡萄球菌能在营养琼脂上生长，但 链球菌在血琼脂上才能生长良好； 肠球菌、李斯特菌和绿色气球菌都能 在 6.5%Nacl 中生长，而 D 群链球菌（非肠球 菌）不生长；空肠弯曲菌在 42 ℃ 生长，在 25 ℃ 就不生长；霍乱弧菌在碱性琼脂上生长 良好；嗜血杆菌宜在 5%-10% С Ο 2 环境下培 养；肉汤中链球菌生长链状排列，便于区别 微球菌科内其他细菌。 3 、 细菌的菌落、色素、溶血性、气 味等是细菌鉴定的重要特征。如葡萄球菌 在羊血琼脂上的菌落直径大于链球菌；而 溶血性仍用于链球菌的生化鉴定；普通变 形杆菌、奇异变形杆菌、溶藻弧菌均能迁 徒生长，但变形杆菌有恶臭味，而溶藻弧 菌没有； 铜绿假单胞菌，菌落扁平，边缘呈 锯齿状，具有生姜味 , 产生绿色素，有金 属光泽；粘质沙雷菌产红色色素；紫色色 杆菌产紫色色素；聚团肠杆菌、板畸肠杆 菌和嗜麦芽杆菌窄食单胞菌等产黄色色素； 马红球菌产横红色素等这样可缩小鉴定范 围； 菌落呈蜡样（蜡样芽胞杆菌）、胶胨状 （克雷伯菌和粘性铜绿假单胞菌）、表面颗 料状（结核分枝杆菌、奴卡菌）也是相应细 菌的特征。此外，铜绿假单胞菌和需氧菌可 在肉汤培养基的液面上形成菌膜等。 4 、形态学在细菌鉴定会中的作用。如 奴卡菌：新分离的幼龄菌为 G + 呈短杆状或 细长杆状，随培养时间延长，菌落表面有 皱褶，呈颗粒状，革兰氏染色不定，形状 渐成丝状。 马红球菌于血琼脂平皿上 35 ℃18 -24 小 时培养的，直径 0.5mm 左右，不透明，淡黄 色菌落， 48-72 小时后菌落大至 1-2mm ，易 乳化，出现粘液状，大部分菌落产生桔红、 橙红色素；对标本直接涂片根据镜检结果 结合临床不可快速诊断，如泌尿生殖道涂 片中可见到典型肾形的 G - 双球菌分布于白 细胞内外，可诊断为淋菌。 明确革兰染色性是细菌鉴定的前提， 革兰染色错误细菌鉴定肯定错误，即使自 动化仪器也是如此。同时根据细菌形态， 染色性可以修正仪器出现的错误报告。 形态观察可很容易区别细菌和酵母杆 菌，完全可以避免误报；莫拉菌属（ G - 球 杆菌、菌体小呈成簇，双、短链状排列）； 不动杆菌（ G - 球状或球杆状，成双排列为 主）可区别常见非发酵的杆菌（直或微弯 的 G - 杆菌）。革兰阳性菌或阴性菌、阳性 球菌或杆菌、阴性球菌或杆菌决定了对细 菌采用何种鉴定系统。 抗酸染色确定抗酸杆菌，改良金泳染色 是奴卡菌、红球菌的鉴定试验之一。应用鞭 毛、芽胞、异染颗粒、荚膜等染色在相关细 菌确认上都是重要特征。 传统方法中对染色性不定 的细菌，还 可通过万古霉素纸片法敏感试验和 3%- 4%KOH 拉丝试验起到佐证作用； G + 菌通常 对万古霉素敏感、拉丝试验阴性； G - 菌则 相反。 5 、动力在各种细菌是简便而关键的试 验。如李斯特菌、肠球菌、 D 群链球菌、 绿色气球菌，它们都是胆法七叶苷阳性， 且形态不易区分，但李斯特 25 ℃ 有动力； 小肠结肠耶尔森菌在 22- 25℃ 有动力， 但在 35℃ 无动力；志贺菌属无动力，沙门 菌属有动力；黄杆菌属无动力，很容易区 别有动力的非发酵的杆菌等。 6 、 氧化酶、触酶试验分别是 G - 菌、 G + 菌鉴定的关键试验，需要传统方法测试， 仪器也要依据上述试验结果，选择相应的 鉴定系统。氧化酶错误可使细菌鉴定错在 “科”水平，如将气单胞菌误认为肠杆菌 科细菌。 触菌错误不可能准确鉴定微球菌科细 菌（微球菌属氧化酶，触酶均阳性，而口 腔球菌属触酶阴