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发酵过程优化与控制 发酵 ? 狭义 —— 厌氧条件下葡萄糖通过酵解途径生成 乳酸或乙醇等的分解代谢过程。 ? 广义 —— 微生物把一些原料养分在合适的发酵 条件下经特定的代谢途径转变成所需产物的过 程。 ? 发酵是一个很复杂的生化过程，其好坏涉及诸多因素： 菌种性能、培养基组成、原料质量、灭菌条件、种子 质量、发酵条件和过程控制等 ? 菌种生产性能越高，其生产条件越难满足。 发酵过程技术原理 ? 分批发酵 ? 补料 - 分批发酵 ? 半连续发酵 ? 连续发酵 分批发酵 ? 几个重要参数： x p d X u X d t d S q X d t d P q X d t ? ? ? ? ? 为比生长速率 ,h -1 ； -q s 为比基质消耗速率 ,(g/g)/h ； q p 为比产物形成速率 ,(g/g)/h 。 ? 生长周期：工业生产从发酵产率和发酵指数及避免染 菌考虑，要尽量缩短适应期。 ? 对数生长期 ? max 最大，其长短取决于培养基，包括溶氧 可利用性和有害代谢产物的积累； ? 稳定期积累大量次级代谢产物， ? ＝ ? （比死亡速率） 根据产物的形成是否与菌体生长同步 关联 ? 生长关联型 通常是初级代谢产物的形成。 ? 非生长关联型 产物形成只与细胞的积累量有关。 次级代谢产物如某些抗生素的合成。 / / p p x p x q Y u d P Y d X ? ? ? ? Y p/x 为以生长为基准的产物得率； q p 为比产物生产速率，即基于细胞生 长量的产物合成速率。 ? q p 随 u 的增长而提高。 ? 为比例系数。 d P X d t ? ? 基质初始浓度对菌生长的影响 基质初始浓度 稳 定 期 的 菌 浓 A B C D X=Y(S 0 － S t ) S 0 为初始基质浓度； S t 为经培养时间 t 的基质 浓度； Y 为得率系数。 ? A － B 区域，当生长停止时， S t 等于 0 ； ? C － D 区域，菌的进一步生长受到有害代谢物的限制。 ? 此方程可用于预测用多少 初始基质能得到相应的菌量。 分批发酵的优缺点 ? 优点 操作简单、周期短、染菌机会少、生产过程容易控 制 ? 缺点 不适用于测定过程动力学（基质抑制、二次生长等） 补料 - 分批发酵 ? 在分批发酵过程中补入新鲜料液，克服由于养分的不 足，导致发酵过早结束。 ? 准稳态：补入的基质等于细胞消耗的基质，故虽然培 养液中的总菌量随时间延长增加，但菌浓度并未提高， 即 dx/dt=0 。 ? 恒化器的稳态和补料 - 分批发酵的准稳态主要区别在于 恒化器的 u 是不变的，而补料 - 分批发酵的 u 是降低的。 优点：能在系统中维持很低的基质浓度， 避免快速利用碳源的阻遏和减缓有害代 谢物的不利影响。 分批补料的优化：通过一描述比生长速 率与比生产速率之间关系的数学模型， 借最大原理可获得比生长速率的最佳方 案。 半连续发酵 ? 在补料分批发酵的基础上加上间歇放掉部分发酵液 （带放）。 ? 放掉的发酵液和其它正常放罐的发酵液一起送去提炼 工段。 ? 补充养分，同时解除 / 消弱代谢产物的抑制。 不足： 丢失了未利用的养分和处于生长旺盛期的菌体；送去提炼 的发酵液体积更大；丢失代谢产生的前体物；利于非产生 菌突变株的生长。 实施：海洋微藻合成藻红素和 EPA 。 需要摸索最佳的培养基更新速率。 连续发酵 ? 发酵过程中一面补入新鲜的料液，一面以相同的流速 放料，维持发酵液原来的体积。（恒化培养） ? 单级连续发酵 ? 多级连续发酵：增加罐的级数和将菌体运回罐内。 利于多种碳源的利用和次级代谢物的生产，如利用 葡萄糖和麦芽糖混合碳源培养产气克雷白氏菌，在第 一级罐内只利用葡萄糖，第二级罐内利用麦芽糖，积 累次级代谢产物。 但系统复杂，用于研究和实际生产有困难。 ? 连续发酵达到稳态后，非生产时间少，因此设备利用 率高，操作简单，产品质量较稳定，可及时排出有害 代谢产物。 ? 污染杂菌：时间长，不断供给系统培养基。 了解杂菌在什么条件下发展成为主要的菌群？（通过计算菌 的积累速率） 在分批培养中任何能在培养液中生长的杂菌将存活和增长，但 连续培养