急性毒性试验设计PPT参考课件.pptVIP

随机化分组 将实验动物编号，从随机数字表上任意横行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字，标于每个动物号下，然后用计划组数去除随机数字，所得余数即为所属组别。 * 以20只动物的完全随机分配为例 动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二 * 完全随机分配后各组所属动物号 组别 动物编号 一 4 7 9 12 二 1 5 8 13 20 14 三 2 6 10 15 18 19 四 3 11 16 17 * 20只动物完全随机分配的结果 组别 动物编号 一 4 7 9 12 19 二 1 5 8 13 14 三 2 6 10 15 18 四 3 11 16 17 20 * 受试物的配制方法 （1）受试化学物的量取： 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。 称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重，定容，计算浓度mg/ml，备用。 吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶中，用溶剂加至刻度。 * 吸量法，计算公式为：X＝ 式中： X——应吸取受试物的容积； A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）； V——容量瓶容积（ml）； d——受试化学物比重； A · V d×1000 * 受试物的配制方法 （2）受试化学物的稀释 等浓度稀释法： 等容量稀释法： * 等浓度稀释法 将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受试物的试验剂量分别为100、200、400和800mg/kg，受试物配制成10 mg/ml，每组动物每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8 ml。 * 等容量稀释法 将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。 * 染毒途径的选择 经消化道染毒：经口灌胃法 采用专用小鼠灌胃针。 左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂直体位，腹部面向操作。 右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。 如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物 立即死亡。 * 观察指标 中毒症状：确定靶器官 ① 行动：不安定、多动、发声； ② 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失调、姿态异常； ③ 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。 死亡和死亡时间 病理学检查及其他指标 * LD50的计算（改良寇氏法） 当急性毒性试验的最大剂量死亡率为100%，最小剂量的死亡率为0%；各组动物数相等；各剂量组的组距等比或剂量对数等差时，用下述基本公式计算LD50： * 当不含0%和100%死亡率时，用下式计算LD50： Xm—最大剂量对数 P—各剂量组死亡率 Pm—最高死亡率 q—各组剂量存活率，q=1-p 以上各式中：i—组距，即相邻两组剂量对数剂量之差 Pn—最低死亡率 ∑p—各剂量组死亡率之和 n—各组动物数 * LD50的局限性 消耗动物量大 获得的信息有限 动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、血液学和其它化验检查所提供的毒性信息 有许多因素影响LD50值的测定，实际上测得的LD50是近似值 *