芸香苷的提取、分离和鉴定[文字可编辑].ppt

芸香苷的提取、分离和鉴定 一、实验目的 1. 熟悉利用化合物的物理、化学性质对其进行分 析和鉴定的方法。 2. 掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的方 法和应用。 二、实验原理 主要是利用芸香苷的物理化学性质对其进行提取分离。 三、操作要点 1. 芸香苷的提取－水提取法 称取槐花米粗粉 20 g （压碎），加沸水 300 ml ，加热煮沸 30 min ，纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤 液，室温放置析晶，待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗 涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称 重。 2. 芸香苷的精制 取粗制芸香苷 2 g ，加蒸馏水 400 ml ，煮沸至芸香苷全部 溶解，趁热抽滤，冷却后即可析出晶体，抽滤，得芸香苷精 制品，置空气中干燥后，称重。 3. 芸香苷的水解 取精制芸香苷 1g ，研细后置于 250ml 圆底烧瓶中，加入 2% 硫酸 100ml ，加热回流 30min ，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷 苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用 50% 乙醇重结晶得精制的含 2 分子结晶水 的槲皮素。 取芸香苷水解后的滤液 10 ml ，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴 60 ℃浓缩至 2 ～ 3 ml ，加 2 ～ 3 ml 乙醇溶解，作为糖的供试液。 四、鉴定 1. 呈色反应 取芸香苷及槲皮素精品约 10 mg ，各用 5 ml 乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 a. Molish 反应 取样品溶液 l ml ，加 10 ％ α - 萘酚溶液 0.5 ml ，振摇后斜置 试管，沿管壁滴加 0.5 ml 硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸 2 滴～ 3 滴，观察并记录颜色变化。 c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加 1 ％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。 d. 三氯化铝纸片反应 在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液 后，各加 1% 三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。 e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液 2 ml ，加入 2% 二氯氧锆甲醇溶液 3 滴～ 4 摘，观察颜色，然后加入 2 ％柠檬酸甲醇溶液 3 滴～ 4 滴，观察并记录颜色变 化。 2. 色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（ 4:1:5 ）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色 ： 喷 洒 三 氯 化 铝 试 剂 前 后 ， 置 日 光 及 紫 外 光 灯 、 （ 365nm ）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。 点 样：提取的芸香苷与槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。 展开剂：乙醇－水（ 7:3 ）或甲醇－水（ 8:2 ）。 展开方式：上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外灯光（ 365nm ）下检视色斑 的变化。 观察记录：记录图谱及斑色颜色。 c. 糖的色谱鉴定 层析材料：定性滤纸。 点 样：糖的供试液及葡萄糖、鼠李糖对照品溶液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（ 4:1:5 ）上层溶液。 展开方式：上行展开。 显 色：苯胺－邻苯二甲酸试液，喷洒后先用电吹风冷吹至于，再吹热风 至出现斑点为止。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 五、思考题 1 ．黄酮类化合物还有哪些提取方法 ? 芸香苷的提取还 可用什么方法 ? 2 ．酸水解常用什么酸 ? 为什么用硫酸比用盐酸水解后 处理更方便 ? 3 ．本实验中各种色谱的原理是什么 ? 解释化合物结构 与 R f 值的关系。