重庆市疾病控制中心疟原虫检验技术.pptx

疟原虫检验技术;; 玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。在用手指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表面，以避免手指上的油污染玻片。; 新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。;①5%的肥皂水煮沸法： 将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水稍冷后，将洁干毛巾擦净后待用。;②清洁液浸泡法：; 配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢加温到全部溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸，待溶液冷却后倒入有盖的大口玻璃缸内。清洁玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中浸泡一两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。浸泡前最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变为墨绿色后即失去清洁作用，不能再用。;二、制片;1.薄血膜涂制：;(4)将推片置于血溶之前与血液相接触，待血液沿推片边缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力均匀迅速将推片由右向左推出而制成薄血膜。涂制得较好的薄血膜只有一层血球，血球的分布排列比较均匀，血膜的末端突出如舌状。 若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚；若推时用力不均匀，则易成梯田状. 若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污，则血膜成多孔状。; 薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴头大一血滴，将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片的一角由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血膜，旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖了疟原虫。 厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或灰尘落在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄血膜的边缘上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。;血片制作和染色质量规范 ;;;三、染色;吉氏染剂粉　0.5g 甘油（中性）25ml 甲醇（纯，分析纯）25ml 将吉氏染剂粉0.5置于乳钵中，加少许甘油充分研磨，再加甘油研磨，直至25ml甘油加完为止。将充分研磨的吉氏甘油液倒入无水，干净的棕色玻塞瓶中，然后分次加甲醇于乳钵洗出染剂倒入瓶中，直至25甲醇将乳钵洗净并全部倒入瓶中，塞紧，充分摇匀，放置室内一星期，每天摇动数次，以后即可使用.; 为了保证染色良好，使疟原虫的红核和兰胞浆分明，感染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂原液时，所用的蒸馏水必须加缓冲液（缓冲蒸馏水）。新鲜蒸馏水可能接近中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空气中的二氧化碳而变为酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲液，使其达到我们需要的酸碱度。;磷酸氢二钠（无水）　　9.5g蒸馏水　　　　　　　　1000ml 磷酸二氢钾　　　　　　9.07g蒸馏水　　　　　　　　1000ml将上二液分别贮存于紧塞的玻瓶中。;稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为最适宜，现用现配，可按下表配制：缓冲蒸馏水的配制（ml）;3.染色步骤：;③染色：;(二)瑞氏染色法：; 瑞氏染剂粉 0.2g 甘油(中性) 3ml (无中性的也可) 甲醇(中性) 97 ml 将瑞氏染粉放入乳钵中，加入甘油充分研磨，然后加入甲醇10 ml，混合后倒入干燥、清洁的棕色玻璃瓶内，分次将甲醇倒入乳钵内，至乳钵内染剂洗净为止，配制好的染液充分摇匀即可使用。;（1）先用蜡笔在厚薄血膜间划一界限，然后用缓冲蒸留水滴2-3滴在已干的厚血膜上，溶血后倾去水滴。（2）加瑞氏染液5-8滴于薄血膜上，染色1-2分钟。（3）加5-8滴缓冲蒸留水于薄血膜上，用吸管混合均匀后把染液引到厚血膜上，使厚薄血膜同时染色约10分钟。（4）用清水轻轻冲去染液，将玻片直立待干后镜检;四、镜检;②小滋养体;③大滋养体;胞浆：阿米巴样，体积 很大，空泡甚小或消失， 兰色 核：2-10个团块，不规则， 疟色素：细杆状，棕黄色，分布不均匀;⑤裂殖体;;⑦大配子体;(2)间日疟厚血片形态; 间日疟的大滋养体相当大，形状不一，变化很多， 胞浆兰色，分散断裂成为大小数目不等、边缘不清楚的圆块，这是间日疟原虫大滋养的特征，核一个，大而明显，呈不整齐的圆形，位于胞浆的中央或边缘。疟色素短杆状，棕黄色，分布于胞浆上中。; 胞浆多，形态变化很大，有分布断裂成块现象，核分裂成数个，较大，呈圆形或不规则的圆形，零乱地分布在胞浆中，棕黄色短杆状的疟色素较多。;; 胞浆多，形态变化很大，有分布断裂成块现象，核分裂成数个，较大，呈圆形或不规则的圆形，零乱地分布在胞浆中，棕黄色短杆状的疟色素较多。;裂殖子12-24个不等，色素集中，位于中央或一侧。; 间日疟原虫的配子体很大，几乎同中性白细胞同样大小，胞浆完整致密呈圆形或椭圆形，