生殖生物学复习总结.docxVIP

1.体外受精技术 包含从配子的发生、体外培养、受精直至生命的形成。所以 ,体外受精技术是生命科学研究的基础 ,也是扩大良种畜胚胎来源的一种主要手段。 由于从屠宰场收集卵巢 , 通过体外受精技术 ,生产大量的廉价胚胎 ,降低了胚胎的生产成本 ,为胚胎移植技术的大面积推广创造了条件。鉴于目前我国没有大规模的良种畜可屠宰 ,以及体外生产胚胎移植后的成功率不高等因素 ,今后应该结合活体采卵技术 ,反复从良种母畜体内采集卵母细胞来生产体 外受精胚胎。同时 ,应该进一步研究提亭体外受精胚胎的囊胚率 ,解决妊娠率不高等技术问题。体外受精技术不仅限于扩大胚胎生产，就整个配子与胚雨生物技术的发展而言，它将 成为胚胎生物技术的最基本的核心关键技术。 所以 ,随着体外受精技术配套技术的不断完善 , 其应用前景十分广阔。 2、卵母细胞的采集和成熟培养 ：(1)超数排卵 : 用促性腺激素处理（ 2）从活体卵巢中采集卵母细胞（ 3）从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞 母细胞的选择 ，采集到的卵母细胞绝大多是与卵丘细胞形成卵丘卵母细胞复合体 COC。未成熟的卵母细胞分四个等级； 卵母细胞的成熟培养 :由超数排卵采集的卵母细胞已在体内发育成熟，不需培养可直接与精子受精 ,对未成熟卵母细胞需要在体外培养成熟。 培养时 ,先将采集的卵母细胞在实体显微镜经过挑选和洗涤后 ,然后放入成熟培养液中培养。家畜卵母细胞的成熟培养液目前普遍采用 TCM199 添加孕牛血清、促性腺激素、雌激素和抗生素成份。通常采用微滴培养法 ,微滴体积为 50-200微升，每滴中放入的卵母细胞数按每 5微升一个计算单位。卵母细胞移入小滴后 , 放入二氧化碳培养箱中培养 ,培养条件为 39℃ 、100%湿度和 5%二氧化碳的空气。牛的培养时间为 20-24h,卵丘卵母细胞复合体经成熟培养后，卵丘细胞层扩散靠近卵母细胞周围的卵 丘细胞呈放射状排列，出现放射冠 ,用 DNA 特意性染料染色后 ,在显微镜下进行核相观察 ,可见卵母细胞处于第 2次成熟分裂中期。 3、体外受精 1．精子的获能处理 :哺乳动物精子的获能方法有培养和化学诱导两种方法。 牛、羊的精子常用化学药物诱导获能 ,诱导获能的药物常用肝素和钙离子载体。 2．受精 :即获能精子与成熟卵子的共培养 ,除钙离子载体诱导获能外 ,精子和卵子一般在获能液中完成受精过程。受精培养时间与获能方法有关。在 B2液中一般为 ⒍8小时而用 TALP 或SF液作受精液时可培养 18-24h。精子和卵子常在小滴中共培养 ,受精时精子密度为 1-9 × 106/ml,每 10微升精液中放人 1-9枚卵子 ,小滴体积一般为 5O~200微升。 4、胚胎培养 提高受精卵发育率的关键因素是选择理想的培养体系。在家畜中 ,胚胎培养液分为复杂的和化学成分明确的培养液两大类。复杂培养液中的成分很多 ,除无机和有机盐外 ,还添加维生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等营养成分和血清 ,最常用的有 TCM199 、B2和F10。用它们培养胚胎时 ,可以采用体细胞共培养体系 ,即体细胞与胚胎在微滴中共同培养 ,利用体细胞生长过程中分泌的有益因子 ,促进胚胎发育 ,克服发育阻断。 5、 哺乳动物的克隆效率为什么低 ,试从克隆操作技术体系方面解释可能的原因 ? 卵母细胞的年龄和细胞周期会直接影响到重组胚 ,重编程过程。卵子成熟后卵母细胞质才获得指导体细胞核膜破裂的能力， 在正常受精胚中 ,母源 mRNAs 在受精到早期胚胎合子型基因激活过程中发挥着核心调控作用。同样，母源信息也能使移入卵母细胞质中的供体基因组 重新程序化 ,这也是核移植所依据的主要原理之一。 供体细胞分化特征越明显克隆效率越低，使用胚胎干细胞作核供体比体细胞的克隆效率要高。发展起来的两步克隆法以第一步核移 植产生的卵裂球或建立的胚胎干细胞系为供体进行第二轮的克隆 ,可以大大提高克隆效率 , 并可以有效地使终端分化的 B细胞、T细胞发生重编程 ,长期体外培养或操作过程中发生的染色体改变也能导致克隆动物发育异常。 6、供体核的重编程不彻底是造成克隆胚胎发育不良的主要原因之一 ,你怎么看 ?试解释。核移植后供体核重编程的效果一般从以下几个方面来评价 (1)囊胚发育率 ;(2) 一直到子宫以后胚胎出生率 ;(3)出生后发育到成年的比率 ;(4)克隆囊胚外植后获取胚胎干细胞的频率等。 直到现在核移植效率仍然非常低 ,而且 ,重构胚发育严重异常 , 妊娠早期流产率和出生后死亡率非常高。此外 ,外界环境引起的信号转导、转录后调控等方面的错误都有可能成为重编程失常的诱导因素。细胞核重编程改变是细胞形态和功能改变 的一个中间事件 ,将其上下游事件联系起来探明重编程的分子机制将是一个很有意义的方向。 @不同的类型、周期、代数、物种对重编程有影响。