现代科技综述知识文库：酶联免疫吸附法.pdf

现代科技综述系列—— 酶酶联联免免疫疫吸吸附附法法 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “酶联免疫吸附法” 的解读，以供大家了解。 酶酶联联免免疫疫吸吸附附法法 酶联免疫吸附法(ELISA)是一项基本的免疫测定方法。 以ELISA为代表的固－液抗原抗体反应体系，大有取代 经典的以同位素标记为基础的液－液抗原－抗体反应 体系。 抗原包被的质量是影响固－液抗原抗体反应的重要因 素。 ELISA使用的微孔板通常为聚苯乙烯板，它 蛋白类抗 原有较强的相互作用。 目前蛋白类抗原的包被技术已经相当成熟。 包被技术的改进主要集中在对聚苯乙烯亲 力较弱的 抗原、短肽、完整细胞及多糖类抗原等的包被上。 半抗原通常以半抗原－载体结合物的形式包被，既能 克服半抗原在微孔板上不易吸附的弱点，又为抗原－ 抗体反应提供合适的空间环境，胡昌勤等在对头孢菌 素半抗原的分析时发现，半抗原通常也存在多个抗体 结合位点，且各位点在与抗体的结合过程中所起的作 用不同，因此 载体结合后，主要抗体结合位点的结 构及空间构象不能有太大的改变，否则 抗体的结合 作用将减弱。 Tiefenauer等对类固醇类半抗原的研究得出相同的结 论，蛋白质是最常见的半抗原载体，但用半抗原－蛋 白质做包被抗原存在两个主要问题：包被抗原制备的 重现性不好，且贮存中不稳定；易 抗血清(体)发生交 叉反应。 T ．A ．Verschoor等(1990)报道，尼龙(如尼龙6)可作为 半抗原的载体。 由DCC为交联剂制备的半抗原－尼龙结合物不仅在室 温放置稳定，用苯酚－乙醇溶解后即可在微孔板上包 被。 P ． rdronneau等(199 1)利用戊二醛(GA)将含有氨基的 半抗原直接与微孔板连接，并以此为基础建立了可行 的ELISA操作程序；虽然上述两项研究均克服了用半抗 原－蛋白质包被的弱点，但使用中半抗原－尼龙可能 更方便。 短肽类抗原在微孔板上的吸附情况差异很大，某些短 肽极难包被。 M ．Zouali等(199 1)报道，利用UV辐射处理微孔板可增 强短肽在微孔板上的亲合力，包被的情况可用生物素 －抗生物素－过氧物酶技术(G ．E ．Griesmann等， 199 1)来检测，对某些来源困难的短肽，可将其羧基直 接与经修饰的微孔板共价连接(J ．S．Ardersen等， 1990)，该方法不仅能减少抗原在包被过程中的丢失， 且使ELISA的灵敏度及重视性都有所提高。 对小分子抗原包被的另一新进展反映在对金属元素的 包被上。 抗金属元素抗体是近年来的新发现，S．M ． Clark(199 1)采用电子束喷镀法实现了对金属铍的包 被，并对抗铍抗体进行了ELISA分析。 ELISA还可用于分析细胞膜表面抗原，虽然某些细胞经 空气干燥即可吸附到微孔板表面，但通常需用戊二醛 固定细胞。 K ．Carroll等(1990年)报道，戊二醛的最适浓度(可有效 固定细胞，但不引起抗体非特异吸附) 微孔板的材质 及检测细胞的特性有关；其最适浓度范围(0 ．05%～ 0 ．025%)非常窄，这些结果有助于对实验条件的选 择。 多糖类抗原通常需经化学修饰以增强 微孔板的亲 力，但利用真空过滤技术(S．H ．Feng等．199 1)可使 之直接吸附到硝酸纤维素膜(NC)上，包被在NC上的抗 原可由酶免疫法检测，从而避免化学修饰过程中抗原 性的改变。 K ． ．Smith等(199 1)尝试在经聚四氟乙烯处理的盖玻 片上包被抗原，并取得对HIV抗体的检测成功，该方 法耗用的试剂量仅为5～10μl，花费比所有其它ELISA 都低。 ELISA的检出线虽然已经达到10 －