现代科技综述知识文库：免疫胶体金探针技术.pdf

现代科技综述系列—— 免免疫疫胶胶体体金金探探针针技技术术 科技是人类区别于动物的重要文明之一， 是人类对自然规律研究 利用的学科。 本文提供对科技基本概念 “免疫胶体金探针技术” 的解读，以供大家了解。 免免疫疫胶胶体体金金探探针针技技术术 金氯酸分子在还原剂的作用下聚合形成金颗粒，由于 颗粒间相互排斥的静电作用 布朗运动，使整个系统 保持在一个相对稳定的水溶胶状态下，即胶体金。 由于胶体金颗粒具有高电子密度，且其表面能结合生 物大分子 ［如抗体、金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)、植 物血凝素、刀豆球蛋白A等］，所以将其包被上生物大 分子后成为一种特异的在光镜 电镜下易辨认的标记 物，在医学及生物学领域可广泛用于有关抗原物质的 分布、定位 发生的研究。 1962年，Feldherr 马歇尔(Marshall)第1次介绍了胶体 金可作为一种在电子显微镜下示踪的标志。 197 1福克(Faulk) 泰勒(Taylor)第1次将胶体金颗粒作为 一种特异的标记物用于电镜研究，他们把胶体金与兔 抗沙门氏菌血清结合后，与细菌一起孵育，在电镜下 见到标记于沙门氏菌表面的胶体金颗粒，一般认为这 是最早使用的免疫胶体金探针技术。 1974年，罗马诺(Roma o)等将胶体金标记在第2抗体 (马抗人IgG)上，实现了间接免疫胶体金染色。 1975年，霍瑞斯伯格(Horisberger)等制备了胶体金－植 物血凝素复合物，应用于扫描电镜研究，同时也用于 透射电镜 冰冻蚀刻电镜的研究。 1977年，霍瑞斯伯格(Horisberger)等建立了制备稳定的 免疫球蛋白－金探针的基本方法，他们将抗体用0 ． 05MNaCl透析，用0 ．2MK2CO3调至H+浓度10 －7(即 免疫球蛋白的等电点)，胶体金(5 m) 的H+浓度10 － 7mol ／L，同时用PEG作为稳定剂，在此基础上制备出 的探针可在5℃下保存1年以上，并在使用中获得满意 结果。 同年，罗马诺(Roma o)等用胶体金标记A蛋白成功。 1978年，Geoghega 等首次报道胶体作为标记物应用于 光学显微镜，B细胞在用抗表面免疫球蛋白 金标记二 抗染色后，在明视野下易观察到阳性记物。 免疫胶体金探针的主要流程就是先利用还原反应制备 出胶体金颗粒，然后将其吸附到特异体羊抗免抗体或A 蛋白等生物大分子上，再利用A蛋白与IgG的Fc端结合 或抗原抗体反应，使金颗粒连接到抗原上，以达到抗 原定性、定位 诊断鉴定的目的。 进入80年代以后，该项技术不断发展，并开始在越来 越多的领域应用。 1980年，罗斯(Roth)等利用胶体金－SPA－异硫氢酸荧 光素系统在荧光显微镜下观察胰腺组织内激素的定位 状况，结果表明与经典的间接免疫荧光法 SPA－胶体 金免疫电镜结果基本一致。 1981年，Da scher创立了金颗粒银显影方法，即免疫 金银染色法，这项新技术迅速地被应用于研究中，而 且大大提高了检测抗原的灵敏度。 同年，Geuze等证实SPA－金技术可用于冰冻超薄切 片。 1982年，罗斯(Roth)用SPA－金探针对多抗原的多重的 双重的标记定位进行研究。 当首先使用较小的金颗粒时，两种不同大小的金探针 之间不发生明显的干扰。 由于建立了精确判定SPA－金颗粒大小的技术，因而产 生均一的小颗粒探针(4 8 m)能更好地进行双重SPA－ 金标记，得到最高的标记密度(标记密度有时由于金颗 粒直径的增大而骤然减小) 。 同年，Giu chedi等首次将此项技术应用于植物病毒的 研究，他们应用金标记免抗外源凝集素抗体，发现大