噬菌体效价的测定 优质课件.pptVIP

实 验 九 噬菌体效价的测定 目的要求 1 、掌握噬菌体效价测定的原理及方法 2 、观察噬菌斑的形态 实 验 内 容 一 培养基和实验物品的准备 本次实验准备工作（ 2 人 / 组） 1 、配制牛肉膏蛋白胨液体培养液 （ pH 7.4-7.6 ） ； （已准备好）。 2 、测定效价时稀释用 9ml 牛肉膏蛋白胨液体培养液—— 2 支 / 组，分装于 18 × 180mm 试管； 3 、牛肉膏蛋白胨固体培养基（ 2% 的琼脂）——底层用， 150ml/ 组，装于 250ml 三角瓶， （用于制备 9 个无菌平板，倒薄一点） 4 、上层用 5ml 牛肉膏蛋白胨半固体培养基（ 0.8 % 的琼脂 ），融化后分装于 15 × 150mm 试管中加塞包扎灭菌， 10 支 / 组； （上周已准备好）。 5 、 1ml 无菌吸管 4 支 / 组。 实 验 内 容 二 噬菌体知识介绍 一、几个重要概念 1 、噬菌体： ? 是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等 微生物的病毒，分布极广，个体很小， 在光学显微镜下看不见，需用电镜观察。 ? 不同的噬菌体在电镜下有三种形态： 蝌 蚪形、微球形和丝形 。大多数噬菌体呈 蝌蚪形，由头部和尾部两部分组成。 2 、噬菌斑： 在混浊的细菌菌面（菌苔）上形成的透 明区域，是由噬菌体不断侵染宿主细胞 裂解形成的，其形状、大小不等。 3 、噬菌体效价： 指 1mL 样品中所含具有侵染活性的噬菌 体（烈性噬菌体）数量 —— 噬菌斑形成 单位（ pfu ， plaque-forming unit ）。 ? 效价（ titre ， titer ）这一名词在不同的 场合有其不同的含义（如抗生素等） 。 二、病毒粒子的构造（模型） 噬 菌 体 的 形 态 及 分 类 科 属 大 肠 杆 菌 T4 噬 菌 体 结 构 示 意 图 大肠杆菌 T4 噬菌体结构示意图 及电镜照片 头部 六角形基板 领环 螺旋形尾鞘 核心或管 （中空） 尾刺或刺突 尾丝 噬菌斑示意照片 宿主细 菌菌苔 噬菌斑 大 肠 杆 菌 T 噬 菌 斑 的 表 型 形 态 三、噬菌体的分类 —— 根据噬菌体与宿主菌的相互关系 ? 烈性噬菌体（ virulent phage ） 能在宿主细胞内复制增殖，产生许多子代噬 菌体，并最终裂解细菌。 ? 温和噬菌体（ temperate phage ） 噬菌体基因与宿主染色体整合，不产生子代 噬菌体，但噬菌体 DNA 能随细菌 DNA 复制， 并随细菌的分裂而传代，存在游离态、整合 态、营养态三种形式。 ? 针对温和噬菌体来说：前（原）噬菌体、 溶源菌 四、噬菌体繁殖（生活周期） 1 、吸附 2 、侵入 3 、增殖（生物合成） 4 、成熟装配 5 、裂解释放 T4 噬菌体吸附和 DNA 的注入 T 偶 数 噬 菌 体 感 染 大 肠 杆 菌 的 扫 描 电 镜 照 片 T4 噬 菌 体 的 生 活 周 期 T4 噬 菌 体 的 装 配 五、噬菌体的应用 1 、细菌的鉴定与分型 噬菌体与宿主菌的关系具有高度特异性， 即一种噬菌体只能裂解一种和它相应的细 菌，故可用于未知细菌的鉴定和分型。 2 、遗传学及分子生物学研究的重要工具 噬菌体基因数量少，结构比细菌和高等细 胞简单得多，且易获得大量的突变体 —— 构建基因文库（ λ 噬菌体）；基因工程载 体；噬菌体展示技术。 3 、细菌感染的诊断与治疗 利用其专一性，可以诊断和治疗一些 相关细菌感染性疾病（用于治疗时，其 分泌的细菌素也可以应用，临床外伤治 疗已有应用） 但专一性也限制了噬菌体在临床上的 广泛应用（人们最需要的是广谱性）。 六、噬菌体的危害 ? 在工业上会造成所培养菌体的大量裂解，使 生产难以完成。 ? 表现形式：①发酵周期明显延长；②碳源消 耗缓慢；③发酵液变清，镜检时，有大量异 常菌体出现；④发酵产物的形成缓慢或根本 不形成；⑤用敏感菌作平板检查时，出现大 量噬菌斑；⑥用电子显微镜观察时，可见到 有无数噬菌体粒子存在。 ? 轻则延长发酵周期、影响产品的产量和质量， 重则引起倒罐甚至使工厂被迫停产。 七、以防为主的措施： 1 、决不使用可疑菌种； 2 、严格保持环境卫生； 3 、决不