线性范围及检测限.pdfVIP

线性与范围 (linearity and range) 分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正 比的试验结果的能力。换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果 ( 测得的响应信号)成线性关系。 所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求 的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小 量之间的间隔，可用 mg／L ~ mg／L、 ug／ml ~ ug／ml 等表示。 线性与范围的确定可用作图法(响应值 Y／浓度 X) 计算回归方 程(Y ＝a+bX)来研究建立。 测定样品时所有生物药物分析方法都必须同时作标准曲线。每次 作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。标准浓度应包括 一定梯度的5-8 个浓度(非线性者如免疫分析可适当增加)，每个浓度只 需测定一次(免疫分析可测定两次并取均值) ；标准曲线应覆盖样品可 能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的 120％，下限为样品最低浓度的 80％ (但应高于 LOQ) ；目前仍广泛采 用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制 r≥0.9900 。对照品的 LOQ 必须包括在线性范围。 线性范围是指 与检测器响应信号成线性关系的样品的含量范围. 一般情况下,标准曲线的最低和最高值是包含在线性范围内的,而 且不同人做的标准曲线,他所取的最低和最高值也不会都相同,打个比 方来说,A 做 5 个点的标准曲线,所选 的标准样品的浓度分别 为:1,5,10,15,20,那么最低最高值分别为 1 和 20,而对于这种要检测的物 质来说,它的线性范围可能是 10E5,要远大于制作标准曲线所选 的 浓度范围.通常在建立一个新方法的时候可以通过文献查到一些物质 的线性范围,而实际工作中,要确切知道某种物质的线性范围必要性可 能也不大。 S/N=3 时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的 3 倍， 注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。 S/N=10 是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的 10 倍时，注入液相 色谱仪的对照品量。 首先，配制一个较低浓度的对照品溶液，注入液相色谱仪，观察其峰 高比基线噪音高多少倍（假设 X 倍），将该溶液稀释到 X/3 倍，基本即 为该物质的检测限，将该溶液稀释到 X/10 倍，基本即为该物质的定量 限。 具体操作时，就是把一定浓度的溶液不断稀释，直到 S/N=3。一 般就是用眼来估计了，不过也可以计算出来，好像是用标准曲线计算 的，具体公式你可以查一下书。 Detection Limit\Limit of Detection\DL\LOD 检出限 DL 是一种比值，用% ppm 表示，等于最低检出浓度与 样品溶液浓度（通常是一个固定的限度值）的比值，因此只有在满足最 低检出浓度和最低检出量的同时才能够做出检出限。 它主要适用于杂质测定中的杂质限度检查项目的方法验证，即你通过 这个验证证明你的方法能够检出足够低的杂质，就是说，如果你作出 的检测限（最低检测浓度）比限度好高，那是万万不行的。检测限不但 要低于限度，最好远远小于杂质限度。 根据分析方法是采用非仪器分析还是仪器分析可用几种方法来确定 检测限度，除了下面所列的方法外其他的方法也可能被接受。 6． 1 根据直观评价 直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于 仪器分析方法。检测限度的测定是通过对一系列已知浓度分析物的样 品进行分析，并以能准确测得被分析物的最小量来建立。【通过进样 大量不同浓度的溶液，证明你所说的检测限是最低的，通常费力不讨 好，但是却是无奈的情况下最好的办法。 6．2 根据信噪比 该方法仪适用于出现基线噪音的分析方法。信噪比 的测定是通过比较含已知低浓度被分析物的样品与空白样品的测试 信号，确定被分析物可被确切地检测的最小浓度，当信噪比在 3 ：1 2 ：1 时的检测限度通常被接受。【此法常用：即观察图谱，保证图谱中信 号峰强度同一段平缓的噪音峰强度的平均值约为 3 ：1 即可。】 6．3 根据响应值的标准差和斜率 【这种方法好啊，省时省力，就是费 脑筋，我目前还没搞懂，如果由高手事件过请指教，废话少说】检测限 度（DL）表示为：DL=3.3δ/S