细菌鉴定中常用的理化生化反应.pdf

实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术 指导教师：张建丽 姓名：高熹 学号：1120152430 细菌鉴定中常用的理化生化反应 一、实验目的 1)了 细菌生理生化反应原理 2)通过细菌对不同含碳、氮化合物的分解利用情况了 细菌碳、氮 代谢类型的多样性。 3)了解细菌在培养基中生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。 二、实验原理 1）糖（醇）类发酵实验 因细菌所含的酶不同，其发酵糖（醇）后的代谢产物亦不相同，即可产酸产 气，或产酸不产气。酸的产生可利用培养基中溴甲酚紫的颜色变化进行判断 （pH5.2 黄色—6.8 紫色），即当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体 产生可由发酵管内倒置的杜氏小管中有无气泡来判断。 2）甲基红（Methyl red）实验（MR 实验） 大肠杆菌等许多细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸可进一步分解成甲酸 （或乙酸\乳酸）,使培养基的 pH 降低到 4.2 以下,此时加入甲基红指示剂，呈现 红色 。 产气杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,培养基的 pH 在 6.2 以上, 故此时加入 甲基红指示剂,呈现黄色。 3）伏-普 (Voges-Proskauer)氏实验(V.P.实验) 4）靛基质(吲哚)实验 大肠杆菌等能分解蛋白质中的色氨酸,产生靛基质 (吲哚),靛基质与对二甲 基氨基苯甲醛结合形成玫瑰色靛基质 (红色化合物)。 5）硫化氢实验 某些细菌能分解含硫的氨基酸 (胱氨酸\半胱氨酸等),产生硫化氢与培养基 中的铅盐或铁盐,形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁.为硫化氢实验。 6）明胶液化实验 某些细菌具有胶原酶,使明胶被分解,失去凝固能力,呈现液体状态,为明胶 实验阳性。 7）淀粉水解实验 细菌不能直接利用淀粉,须经淀粉酶将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解 为葡萄糖(或麦芽糖)后被细菌吸收利用,细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化 来证明,即加碘液测定时，不再产生蓝色。 8）柠檬酸盐利用实验 产气杆菌等能以柠檬酸钠为碳源进行生长。其分解柠檬酸盐后产生碳酸盐, 培养基呈碱性.使培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为蓝色.不能利用柠 檬酸盐为碳源的细菌,在该培养基上不生长,培养基不变色. 三、实验试剂及器材 实验仪器和用具：恒温培养箱、试管、无菌平皿、杜氏小管、接种环,酒精 灯； 微生物材料：大肠杆菌,变形杆菌,枯草杆菌,产气杆菌斜面； 试剂：甲基红试剂、V.P 试剂、吲哚试剂 格里斯试剂（A、B）、卢戈氏碘液； 培养基： 葡萄糖和乳糖发酵培养基（糖类发酵实验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红和 V.P.实验） 胰蛋白水培养基（吲哚实验） 柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基（硫化氢实验） 明胶培养基（明胶液化实验） 淀粉培养基（淀粉水解实验） 柠檬酸钠斜面培养基（柠檬酸盐利用实验） 硝酸盐培养基（硝酸盐利用实验）。 四、实验步骤 1）糖（醇）类发酵实验 1. 编号： 在试管上标明培养基名称,所接种的菌名和组号. 2. 接种： 取 3 支葡萄糖发酵培养基, 1 支接种大肠杆菌，1 支接种变形杆 菌, 留 1 支不接种，作为对照. 3. 乳糖发酵试验接种方法同葡萄糖发酵试验。将已接种好的培养基置 37℃ 培养箱中培养 24h. 4. 结果观察:若细菌能发酵培养基中的糖，可使培养基的 pH 降低, 培养基 中的指示剂呈酸性反应(为黄色),若发酵糖产酸产气,不仅培养基呈黄色,且在倒 置的小玻璃管 (杜氏小管)中有气体（气体占杜氏小管的 10%以上）；若被测细菌 不分解培养基中的糖,则培养基不发生变化。 2）甲基红实验（MR 实验） 1. 取 3 支葡萄糖蛋白胨水培养基，标记同上。 2. 取 1 支接种大肠杆菌，1 支接种产气杆菌,1 支不接种，作为对照。37℃ 培 养 48h，加甲基红指示剂数滴，观察结果。 3. 结果：呈现红色者为阳性, 呈现黄色者为阴性。