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肿瘤动物模型的构建—— 白血病篇 导读 白血病（Leukemia）是一种常见的恶性血液疾病，俗称 血癌。据统计，白血病是儿童恶性肿瘤的头号原因，在儿童及 35 岁以 下成人中发病率位居第一[1]。同时也是十大恶性肿瘤之一。目前，白 血病具体的发病原因至今尚未研究透彻，因此建立合适的白血病动物 模型，对于白血病发病机制及药物研发具有重要意义。 本期为大家综述了白血病的基本情况及小鼠模型的分类、建立方 法和应用。 第一章： 白血病基本常识白血病是常见液体瘤 白血病是常见的液体瘤，与结肠癌、肝癌等实体瘤不同的是，它 是造血干细胞的异常分化和过度增殖导致，因此肿瘤细胞会遍布全 身，会侵犯身体的每个脏器，造成全身衰竭。 造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新和分 化成各类成熟血细胞的能力。如下图为造血干细胞可分类形成各种血 细胞，如红细胞、血小板和白细胞： 造血干细胞分化成各类血细胞（图片来自 cancer.gov 网站）白血 病致病因素有哪些呢？ 现阶段认为白血病的发病因素：化学因素、 电离辐射、药物、毒 物、病毒、遗传因素等有关。 白血病主要分为四类 根据白血病细胞的成熟程度和自然病程，白血病可分为急性和慢 性两大类，临床上，白血病共分为四大类：急性髓系白血病（AML）、 急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性髓系白血病（CML）和慢性淋巴细 胞白血病（CLL）。儿童白血病 90%以上是急性的，其中急性白血病中 70%～80%是 ALL 。 第二章： 实验研究所用白血病模型首先，来了解一下常用的细 胞株白血病中常用的小鼠品系 用于建立白血病小鼠模型的小鼠可分为近交系和突变系。根据不 同类型和目的选择不同的小鼠品系，具体如下图所示： 最后说说常用的动物模型，主要分为三类： 一、异种移植模型 异种移植模型是最常用的淋巴瘤动物模型。根据实验目的选择相 应的小鼠品系和细胞株后，通常细胞的接种方式为皮下注射、腹腔注 射和尾静脉注射。 皮下注射和腹腔注射操作简单，很快在接种部位形 肿瘤或腹腔 内形成多发性肿瘤，适合筛选针对白血病的药物。但该类模型与白血 病临床病人实际情况差距较大。异种移植型白血病模型异种移植示意 图[2] 尾静脉注射接种模型，可形成全身性扩散的白血病模型。符合白 血病临床过程规律，此模型以动物生存期作为评价药效的主要指标， 并对采血样本进行血细胞的形态学检测。 下面以尾静脉注射模型实验步骤为例： 根据实验目的选择实验小鼠和细胞（如 NOD-SCID 小鼠和人急 性早幼粒细胞白血病细胞株）；荷瘤细胞量一般 1-2 × 105/只。 破坏动物残留的免疫能力：给予小鼠射线照射（如 1.5Gy 剂量 60Coγ 射线全身照射）； 细胞接种：小鼠射线照射 4-5 天后，收集对数期生长的细胞，尾静 脉注射细胞悬液； 移植后第二天对小鼠分组，进行给药；统计小鼠生存率。 评价：此种模型易建立，成瘤率高，成瘤时间差异小，是筛选抗肿 瘤药物常用的动物模型。 数据分析：小鼠经 X 射线照射后尾静脉注射 2×105 个 hMRP8- PML-RARα 细胞，建立 ATRA 耐药移植型小鼠模型[3]。如下图： 图A 统计生存曲线，给药组（LG362B 和阳性药 ATRA）均可延长 小鼠生存期。 图C 与 D 剥离小鼠脾脏拍照并称重，患白血病小鼠较正常小鼠 脾脏肿大，给药组（LG362B 和阳性药 ATRA）均可使脾脏恢复正常。 图e ：取小鼠外周血和骨髓细胞制作涂片进行 Wright-Giemsa 染 色，从形态学上可观察到给药组（LG362B 和阳性药 ATRA）可诱导白 血病细胞分化。 二、基因修饰型白血病模型 基因修饰型白血病模型主要为利用基因编辑技术进行敲除或插 入特定基因，从而诱发动物产生白血病。如骨髓增生异常综合征 （MDS）转化为急性髓系白血病是由于 NRAS 和 BCL-2 在形成复合 物，建立骨髓增生异常综合征转化 AML 小鼠模型 MRP8[NRASD12/hBCL-2]筛选出 BCL-2 抑制剂 ABT-737[4] 。下图为 主要的基因工程型白血病模型[5] ：评价：基因修饰型动物模型成瘤