第十一章 植物的遗传转化技术.pptVIP

第十一章　植物的遗传转化技术 陈观水 生命科学学院 jimchen7909@163.com 1390591445 植物的遗传转化技术 主要内容： 第一节 植物遗传转化的受体系统 第二节 植物遗传转化方法 第三节 转基因植株再生及其检测 第四节 转基因植物的研究成果及安全性 学习的目标与要求： 了解植物遗传转化系统的定义及种类，了解植物遗传转化的方法，掌握农杆菌转化的原理。了解转基因植物的再生、检测方法、应用及其安全性。 植物的遗传转化技术 遗传改良是提高作物产量和品质的重要途径。传统方法限制在种个体间实现基因转移，对后代的可预见性较差，同时周期长。 转基因技术(transgene technology)是指将人工分离和修饰过的外源基因导入生物体的基因组中，从而使生物体的遗传性状发生改变的技术。 转基因植物(transgenic plant)是指利用重组DNA技术将克隆的优良目的基因整合到植物的基因组中，并使其得以表达，从而获得具有新的遗传性状的植物。 一、植物遗传转化的受体系统 成功的基因转化首先依赖于良好的植物受体系统的建立。所谓植物转化受体系统是指用于转化的外植体通过组织培养途径或其它非组织培养途径（如发苗产生子叶、胚轴等），能高效、稳定地再生无性系，并能接受外源DNA整合，对转化选择抗生素敏感的再生系统。 一、植物遗传转化的受体系统 建立植物转化受体系统的主要考虑因素 高效稳定的再生能力 较高的遗传稳定性 具有稳定的外植体来源 对选择性抗生素敏感 对农杆菌侵染具有敏感性 一、植物遗传转化的受体系统 再生系统的选择 选择年幼的外植体：易于脱分化 选择增殖能力强的外植体 选择萌动期的外植体 选择具有强再生能力基因型的外植体 遗传稳定性好 　　　总体来看，主要采用胚、幼惠、顶端分生组织、幼叶、幼茎等。 一、植物遗传转化的受体系统 植物基因转化受体系统的类型 愈伤组织再生系统： 悬浮细胞受体系统： 原生质体再生系统： 胚状体再生系统：最为理想的基因转化受体系统 生殖细胞受体系统（种质系统）： 叶盘受体系统 整株活体受体系统 一、植物遗传转化的受体系统 植物基因转化受体系统的建立程序 外植体的选择制备 高频再生系统的建立 外植体的选择、最佳培养基的确定 抗菌素的敏感性试验 既有效抑制细菌生长，又不影响植物的正常生长。 农杆菌的敏感性试验等 选择侵染敏感的农杆菌种类 一、植物遗传转化的受体系统 二、植物遗传转化方法 转基因方法 　概括起来说主要有两类： 　　　第一类是以载体为媒介的遗传转化，也称为间接转移系统法。如农杆菌介导法、病毒介导法。 　　　第二类是外源目的DNA的直接导入。如基因枪法、电激法、超声波法、显微注射法、花粉管通道法等。 二、植物遗传转化方法 载体介导转移系统 　最常见的转基因方法。 　　　将外源基因重组进入适合的载体系统，通过载体将携带的外源基因导入植物细胞，整合在核染色体组中并随核染色体复制和表达。 　　　农杆菌Ti质粒（tumor-inducing plasmid）或 Ri质粒(root-indcing?plasmid)介导法是迄今为止植物基因工程中应用最多、机理最清楚、最理想的载体转移方法。 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 　 农杆菌是一类革兰氏阴性土壤杆菌（G－），活在植物根的表面依靠由根组织渗透出来的营养物质（冠瘿碱）生存的一类细菌。 　　　农杆菌可分为根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciems（含Ti质粒）和发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes （含Ri质粒） ，在植物基因工程中以根瘤农杆菌的Ti质粒介导的遗传转化最多。 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 毒性区（vir区）：激活T－DNA的转移 　T－DNA区： 侵染植物时，从Ti质粒上被切割，转移到植物细胞中，带有与肿瘤形成有关的基因 　接合转移区： 存在与细菌间进行接合有关的基因 　复制起始区： 保证Ti质粒进行自我复制 二、植物遗传转化方法 1.农杆菌介导法 转移DNA，编码冠瘿碱的合成，能随机整合到植物的染色体上。长度一般为12-24kb，是Ti质粒最重要的部分。左右边界分