2019人教版高中生物选修一53 血红蛋白的提取和分离课件1 共26张.pptVIP

课题 3 血红蛋白的提取和分离 思考 1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子。 思考 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的 形状和大小、所带电荷的性质和多少、 溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲 和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 一、基础知识： ㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 2 、凝胶： 一些微小的 多孔球体 （内含 许多贯穿的通道，由多糖类构成 如葡聚糖、琼脂糖） 1 、概念： 根据 相对分子质量的大小 分离蛋白质的方法 当不同的蛋白质通过凝胶时， （ ）的蛋白质容易 进入凝胶内部的通道，路程（ ）， 移动速度（ ），而（ ） 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只 能在（ ）移动，路程（ ）， 移动速度（ ），相对分子质量不同 的蛋白质因此得以分离。 相对分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 3 、原理： 4 、具体过程 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的 进行过程可表示为图中哪一个 能够抵制（ ) 对溶液的（ ） 的影响，维持 PH 基本不变。 ㈡ 缓冲溶液： 1 、作用： 外界的酸或碱 PH 值 2 、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制 而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得 （ ）使用的缓冲液。 1 － 2 使用比例 在不同 PH 范围内 3. 为什么在本实验中实用 缓冲溶液 ? 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲 液是 磷酸缓冲液 ，目的是利用缓冲液模 拟细胞内的 PH 环境，保证血红蛋白的正 常结构和功能，便于观察（ 红色 ）和材 料的科学研究（ 活性 ） 思考：人体血液中缓冲液 ? NaH 2 PO 4 / Na 2 HPO 4 H 2 CO 3 / NaHCO 3 （三） 电泳： 1. 概念： 带电离子在 电场 作用 下发生 迁移 的过程。 2. 原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、 核酸等都具有可解离的基团，在一定 的 PH 下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会 向着与其所带 电荷相反 的 电极移动 。 ③电泳利用了 待分离样品 中各种 分子带 电性质 的差异以及分子本身的大小，形 状的不同，使带电分子产生不同的迁移 速度，从而实现样品中各种分子的分离。 3. 类型 : 琼脂糖凝胶电泳、 聚丙稀酰胺凝胶电泳。 测定（ ） 通常用 SDS — 聚丙稀酰胺凝胶电泳 蛋白质相对分子质量 使用 SDS- 聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋 白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 二 实验操作 ---- 蛋白质的提取和分离： 样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定 蛋白质的提取和分离： （ 1 ）样品处理 洗涤 红细胞 血红蛋白 释放 分离 血红蛋白溶液。 （ 2 ）粗分离（透析） 目的 步骤 a 过程： b 目的： c 原理： 除去样品中分子量较小的杂质 透析袋能使小分子自由进出，而大分 子保留在袋内。 (3) 纯化： （ 4 ）纯度鉴定： 通过凝胶色谱法将分子量 较大的杂质蛋白质除去。 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 血 液 血 浆 水分 其他： 血 浆蛋白、无机盐、 磷脂、葡萄糖等 血 细 胞 白细胞 血小板 红细胞 （ 最多 ） 血红 蛋白 （ 90 ％） 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁红 素基团 2. 你认为鸟类血液和哺乳动物血液 中，最好用哪种血液来提取血红蛋 白？为什么？ 鸡 的 红细胞 具有细胞核，含有 DNA ， 便于进行 DNA 的提取 。 人 的 红细胞 无细胞核，结构简单， 血红蛋白含量丰富便于 提取血红蛋白 。