2019年高效液相色谱仪的应用.pptVIP

紫外检测器（ UVD ） 特点： 应用最广，对大部分的有机化合物 有响应；灵敏度高；线性范围广；波长可 选；对流动相的流速和温度变化不敏感， 可用于梯度洗脱。 分析前，色谱柱平衡差 不多时，打开检测器； 分析完成后，马上关闭 检测器。 光电二极管阵列检测器 (PDA) ? 由 1024 个二极管阵列组成，可检测特定波长，计算 机快速处理，三维立体谱图。 吸 光 度 示差折光检测器（ RID ） ? 是通用型检测器（因为每种物质具有不同的折光指 数）；灵敏度低、对温度敏感、 不能用于梯度洗脱。 类型 ： 偏转式 反射式 干涉型 荧光检测器（ FD ） ? 高灵敏度、高选择性： 对多环芳烃，维生素 B 、 黄曲 霉素、卟啉类、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等 有响应。 蒸发光散射检测器（ ELSD ） ? 又称蒸发型质量检测器，属于通用 型质量检测器。其 工作原理： 样品 组分从色谱柱后流出，进入检测器 后，经历雾化、流动相蒸发和（光 源光路）检测三个步骤。 流动相 雾化气体 雾化 蒸发 检测 蒸发器 雾化器 光源光路 Step 1: Nebulization ? Column effluent passes through nebulizer needle ? Mixes with nitrogen gas ? Forms dispersion of droplets Step 2: Mobile Phase Evaporation ? Droplets pass through a heated zone ? Mobile phase evaporates from the sample particle ? Dried sample particles remain Step 3: Detection ? Sample particles pass through an optical cell ? Sample particles interrupt laser beam and scatter light ? Photodiode detects the scattered light ELSD 优缺点 ? 与示差折光检测器相比： ? 灵敏度高； ? 对流动相系统温度变化不敏感； ? 可进行梯度洗脱。 ? 与紫外 - 可见光检测器相比： ? 能解决最困难的 HPLC 检测问题。可对磷脂、皂苷、 糖类、聚合物、树脂等无紫外吸收或紫外吸收系数 很小的化合物进行检测； ? 无需测定定量校正因子。 蒸发光散射检测器（ ELSD ） 优 点： 可以梯度洗脱；流动池死体积不影响 检测灵敏度、喷雾气体消耗量少；雾化器和漂 移管易于清洗。 缺 点： 受样品组分和流动相挥发性的影响。 用 途： 监测碳水化合物、脂肪酸、油脂、聚 合物、药物等多种样品。 6 HPLC 分类及分离原理 ? 吸附色谱 ? 分配色谱 ? 离子交换色谱 ? 凝胶色谱 ? 亲和色谱 吸附色谱 ? 固 定 相 ： 固体吸附剂，如 硅胶、氧化铝等，较常使用的 是 5- 10μm的硅胶吸附剂。 ? 流 动 相： 不同极性的一元 或多元溶剂。 ? 原 理： 根据填充剂吸 附活性点对样品的吸收系数 不同而分离。 ? 适用范围： 分离相对分子质 量中等的脂溶性试样，对具 有官能团的化合物和异构体 有较高选择性。 Flow 流动相 活性吸附点 固定相 液固吸附色谱 分配色谱 ? 固定相与流动相均为液体； ? 基本原理： 组分在固定相和流动相上的分配； ? 流 动 相： 对于亲水性固定液，采用疏水性流 动相，即流动相的极性小于固定液的极性（ 正相 normal phase ），反之，流动相的极性大于固定 液的极性（ 反相 reverse phase ） . 正向色谱法与反相色谱法比较 从下表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色 谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。 正向色谱法 反相色谱法 固定相极性 高～中 中～低 流动相极性 低～中 中～高 组分洗脱顺序 极性小的先洗出 极性大的先洗出 分配色谱 ? 固 定 相： 早期涂渍固定液，固定液流失， 较少采用； ?