2019年食品中单核细胞增生李斯特氏菌及其检验.pptVIP

三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 ? 2 、样品的处理 : 以无菌操作采取样品 25ml(g) 置于灭菌均质器中 , 加 入 225ml 的 EB 和 LB 增菌液 , 充分搅拌均匀 . 如不能及 时检验 , 可保存在4℃冰箱中 . ? 3 、增菌培养 EB 增菌液放入 (30+- 1)℃温箱中培养 48h-7d.LB1 增 菌液放入 (30+- 1)℃温箱中培养 24h, 取出 0.1ml 加入 10ml 的 LB2 增菌液中 2 次增菌 . 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 ? 4 、分离培养 ? 将 EB 增菌液和 LB 2 增菌液分别画线接种于 MMA 选择性 培养基琼脂平板上 , 置 (30+- 1)℃培养 48h 小时 , 挑选 可疑菌落 , 用白炽灯 45 度角斜光照射平板 , 该菌的菌 落为灰蓝或兰色小圆形菌落 . ? 选择 MMA 平板上 5 个以上的可疑菌落接种三糖铁琼脂 和 SIM 动力培养基 , 培养于 (25+- 1) ℃,观察是否有 动力 , 且伞状或月牙状生长 . 一般观察 , 阳性者作下 一步实验 . 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 三糖铁（ TSI ）琼脂试验 SIM 动力试验 接种三糖铁琼脂， 35 ℃培养 5 天。 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 ? 5 、纯培养 将上述有动力、伞状，并在三糖铁琼脂培养基上 层下层产酸而不产硫化氢的可疑菌落接种于胰酪 胨大豆琼脂培养基（ YSA-YE ）上，做纯培养，供 做证实试验鉴定用． 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 ? 6 、染色镜检：从 YSA-YE 平板上挑 取可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿 片查．该菌为阳性无芽孢杆菌；用生 理盐水制成菌悬液，在油镜或相差显 微镜下观察，该菌出现轻微旋转或翻 滚样运动． 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 革兰氏染色阳性 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 ? 6 、生化试验：将上述可疑菌落做进一步的生化试验， 该菌的生化特征及种间区别如下： ? + 为阳性； - 为阴性；√为有反应 菌种 项目 溶 血 反 应 硝酸 盐还 原 尿素 酶 MR 试 验 V-P 试 验 甘露 醇 鼠李 糖 木糖 七叶 苷 H2O2 酶试验 单增 ＋ － － ＋ ＋ － ＋ － ＋ ＋ 绵羊 ＋ － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋ 英诺克 － － － ＋ ＋ － √ － ＋ ＋ 威尔斯 － － － ＋ ＋ － √ ＋ ＋ ＋ 西尔斯 ＋ － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋ 格氏 － － － ＋ ＋ ＋ － － ＋ ＋ 墨氏 － ＋ － ＋ ＋ ＋ √ － ＋ ＋ 三、单核细胞增生李斯特氏菌检验 ? 6 、生化试验 溶血试验： 7% 羊血琼脂平板，划分小格，刺种菌落。 做阳性对照和阴性对照（英诺克李斯特氏菌）。 35℃培养 24-48 小时，于明亮处观察。 单核细胞增生李斯特氏菌在 刺种点产生窄小的透明β 溶血环。 第三节 单核细胞增生李斯特氏菌及其检验 ? 主要内容： 一、生物学特性 二、流行病学 三、检验 四、控制 第八章 食品中其它致病菌的检验 李斯特氏菌属 ? 李斯特氏菌属包括七个种： 单核细胞增生李斯特氏 菌 、绵羊李斯特氏菌 、英诺克李斯特氏菌 、威尔斯 李斯特氏菌 、西尔李斯特氏菌 、格氏李斯特氏菌 、 默氏李斯特氏菌。 ? 其中单核细胞增生李斯特氏菌对人类致病性强，绵羊 李斯特氏菌对人类也有一定的致病性，其余李斯特氏 菌无致病性。 单核细胞增生李斯特氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的 病原菌。 它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现 为败血症、 脑膜炎和 单核细胞增多 。 它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李 氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中 仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要 病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中， 必须加以重视。 全身传染 ? 毒血症：病原菌在入侵的局部生长繁殖，细菌不侵入血