DNA的粗提取与鉴定(精讲精析).pptVIP

（四） DNA的析出与鉴定 加入与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数为95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 用玻璃棒沿一个方向搅拌， 卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否 表示1个DNA分子直径的大小？ DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个DNA子聚在一起形成的 2. DNA的鉴定 ⑴ 两支试管中分别加入2mol/L NaCl溶液5ml ⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物 ⑶ 各加入二苯胺试剂4ml ⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min ⑸ 冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 溶解丝状物的溶液变为蓝色 防止血液凝固 血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞，离心后除去的上清液是血浆 用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA 过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA DNA在溶液中呈溶解状态 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出.应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕 因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中. 制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心 ↓ 破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同一方向快速搅拌 ↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 溶解核内DNA…… 加入2mol/LNaCl，同一方向搅拌 ↓ →过滤，除去不溶的蛋白质等杂质 DNA析出……加蒸馏水至0.14mol/L，搅拌， ↓→过滤，除去溶解的蛋白质等杂质 再溶解到 2mol/LNaCl溶液中，搅拌，溶解 DNA初步纯化………与等体积95％冷酒精混合，搅拌，析出 白色丝状物 ↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。 DNA鉴定……………… 二苯胺，沸水浴，搅拌，呈现蓝色 ↓ 整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出” 此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出？ 分别在哪一步？ 1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3、二苯胺要现配现用，否则会影响鉴定效果。 三、操作提示 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多； 二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功， 如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备 四、课题成果评价 2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和0.14 mol／L对DNA有何影响? 1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( ) A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA B 答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出 练习 3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成 ( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色 4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液? 答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。 D 5、请解释提取DNA的实验操作中主要的步骤的目的。 答：提取DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。 * 6.下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是（ ） C 0.14 DNA 溶解度 0.14 0.14 0.14 DNA 溶解度 DNA 溶解度 DNA 溶解度 A B C D NaCl浓度 NaCl浓度 NaCl浓度 NaCl浓度 7.DN