2020上课基因工程一轮复习.pptVIP

基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 基因文库？ (1) 从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 cDNA文库的构建模式图 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 双链DNA (cDNA) 某种生物的mRNA 核酸酶H DNA聚合酶 与载体连接后导入受体菌贮存，组成cDNA文库 基因组文库与cDNA文库的比较P10表 文库类型 基因组文库 cDNA文库 大小 基因中是否有启动子 基因中是否有内含子 基因多少 物种间的基因交流 小 大 有 无 有 无 某种生物的全部基因 某种生物的部分基因 部分基因可以 可以 如何从基因文库得到所需的目的基因？ （2）利用PCR技术扩增目的基因 1、定义：PCR——多聚酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 通过此技术，可获取大量的目的基因。 DNA双链复制 2、原理： 3、条件： 4、过程： 5、方式： 一段已知目的基因的核苷酸序列 模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）能量 以_____方式扩增， 即____（n为扩增循环的次数） 指数 2n 6、仪器： PCR扩增仪 PCR技术扩增与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 原料 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制(PCR扩增仪内) 主要在细胞核内 热稳定的DNA聚合酶（Taq酶） 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 解旋酶、 普通的DNA聚合酶等 （3）人工合成 反转录法： 目的基因的mRNA 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 基因的脱氧核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 二、基因表达载体的构建——核心 （1）用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。 （2）用_________ __切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 1.过程: 目的基因 载体 同一种限制酶 T4 DNA连接酶 15oC 重组体 载体自连 目的基因 自连 目的基因与运载体结合 3.基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是RNA聚合酶识别并结合位点。 位于基因的末端,终止转录。 检测受体细胞中是否有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 2、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 2.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端, RNA聚合酶的结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 三、将目的基因导入受体细胞 目的基因进入_____ ____内，并且在受体细胞内维持_ ___和___ __的过程。 转化: 受体细胞 稳定 表达 1、导入植物细胞: 2、导入动物细胞: 3、导入微生物细胞: 常用方法： 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射法 感受态细胞法（或Ca2+转化法） 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 农杆菌特点: 能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 两次拼接？两次导入？ （2）基因枪法 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 适用于单子叶植物 （3）花粉通道法 花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新