DNA的粗提取与鉴定优质课.pptVIP

§5.1 DNA的粗提取与鉴定 汕头市潮阳实验学校 任培勇 2018.3 一.基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2.提取DNA的基本思路 提取DNA，去除其他成分。 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异。 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出 3.DNA等大分子的理化性质 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质进一步分离。 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶——水解 ，对DNA没有影响。 ②高温——大多数 不能忍受60～80℃,而 在80℃以上才会变性。 ③洗涤剂——溶解细胞膜，能去除 和 ;但对DNA没有影响。 蛋白质 蛋白质 DNA 脂质 蛋白质 1.试剂： 。 2.条件： 。 3.现象： 。 4.总反应式： （二）DNA的鉴定 二苯胺 沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 沸水浴 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）除去滤液中的杂质(纯化) （四） DNA的析出与鉴定 二.实验设计 （一）实验材料的选取 从下列材料中选取2～3种:菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌 1.取材原则：? . ? . 2.能选择哺乳动物成熟的红细胞吗？ ；理由是 。 3.一般能选大肠杆菌吗？ ； 。 取材方便 富含DNA 不能 哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和细胞器，没有DNA分子 不能 大肠杆菌细胞较小且细胞内所含的DNA含量少 二.实验设计 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.制备鸡血细胞 ?向鸡血细胞中加入柠檬酸钠的作用是 。 ?将血液静置一段时间后：上清液： 。 下层液： 。 2.破碎细胞，释放DNA ?加入蒸馏水的目的是 。 ?过滤：DNA存在于 （滤液/纱布上）；滤液中含有 。 ③植物细胞不用蒸馏水而用洗涤剂： 防止血液凝固 血浆 血细胞 使细胞吸水涨破 滤液 DNA和其他物质（核蛋白、RNA等） 二.实验设计 能溶解细胞膜，利于DNA释放 （三）除去滤液中的杂质 讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 二.实验设计 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 【方案二】是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开； 【方案三】利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 （四） DNA的析出与鉴定 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95％)， 静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水 1.DNA的析出：粗提取DNA 二.实验设计 2. DNA的鉴定 ⑴ 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml ⑵ 其中一支试管中加入DNA丝状物 ⑶ 各加入二苯胺试剂4ml ⑷ 混匀后，置于沸水浴中加热5min ⑸ 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象： 溶解丝状物的溶液变为蓝色 【方法步骤】 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 3.溶解细胞核内的DNA 2mol／L的NaCI溶液40mL 4.析出含DNA的粘稠物 蒸馏水 ①防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地析出 以提取动物细胞中的DNA为例： 5.滤取含DNA