4.4 色谱鉴别法病理生理学.pdf

色谱鉴别法 高效液相色谱和气相色谱 鉴别法 特点： 分离效率高：一根色谱柱可以同时分析几十种甚至上 百种化合物，并且保持很高的柱效。毛细管气相色谱 6 柱的理论塔板数可以达到10 /m ，高效液相色谱柱一 4 4 般可以到到5*10 ～8*10 /m。 分析速度快：一般色谱法可以在几分钟至几十分钟内 完成一个复杂样品的分离分析。 特点： 灵敏度高：例如，气相色谱中，氢火焰离子检测器对 烃类的检测限达到10-12g/ml 。高效液相色谱中，紫外 检测器对中等强度紫外吸收的溶质，最低检出限度可 达10-10g/ml 。 样品用量少：由于使用高灵敏度的检测器，一次分析 仅需纳克至数微克的样品。 特点： 应用范围广：气相色谱法广泛应用于气体或可转化为 易挥发物的液体及固体样品的分析。高效液相色谱法 适用于分析挥发性低、热稳定性差、相对分子量大的 样品，也可以分析气相色谱不能分析的离子型化合物。 原理：在同一台色谱仪和完全相同的色谱条件下， 同一化合物具有相同的保留时间。如果仪器运转正常， 色谱条件稳定，在同样的色谱条件下，多次测定的保 留时间具有较好的重复性 方法：一般规定按供试品含量测定项下的高效液相 色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保 留时间应一致。含量测定方法为内标时，可要求供试 品溶液和对照品溶液色谱图中药物的保留时间与内标 物峰的保留时间比值应相一致。 应用：主要用于复杂样品各组分鉴别。 注意：色谱系统的稳定性要好，同一物质不同时间进样的 保留时间重现性应该有保证。 液相色谱中这就要求流动相与固定相相匹配，例如疏水性 固定相C18链在水相中，故在常规C18柱的反相色谱系统中，流 动相有机溶剂的比例通常不应低于5% ，否则将造成色谱保留 行为不稳定，不利于鉴别。 在实际操作中，由于条件不明原因的微小变化，有时存在 同一物质在表面完全相同的色谱系统中保留时间不一致的情况， 尤其梯度洗脱时此种现象更为常见。而当对保留时间的一致性 未予具体规定时，可增加将供试品溶液与对照品溶液等量混合， 进样后出现单一色谱峰作为鉴别依据。 把对照品和待测物分别做色谱，对比tR 示例一神香苏合滴丸中麝香酮的气相色谱鉴别 色谱条件: 程序升温: 130 ～240 ℃( 25 ℃/min),检测器: 250 ℃; 柱流量: 1ml/min 。 对照品溶液制备：麝香酮对照品适量, 加无水乙醇制成每 1ml 含10μg 的溶液, 作为对照品溶液。 供试品溶液制备：取本品50 粒 , 置具塞锥形瓶中, 加入 20ml 水, 超声处理 ( 功率300W , 频率50kHz)10min , 转移置分液漏 斗中, 以60ml 正己烷提取4 次, 合并正己烷提取液, 作为供试 品溶液。 5.15 麝香酮对照品色谱图 神香苏合滴丸色谱图 结果：供试品溶液与对照品在相同保留时间有相应的色谱 峰。麝香酮与其他组分分离良好。 把对照品和待测物分别做色谱，对比tR 示例二 高效液相色谱法检测降糖药制剂中违法添加 的格列吡嗪 色谱条件: 色谱柱Diamonsil C18柱 ( 250mm ×4.6mm , 5 μm) , 流动相: 甲醇-pH3.5 0.038 mol/L磷酸按缓冲液 ( 51:49 ) ,流速 0.8ml/min, 柱温35 ℃, 检测波长275nm 。 结果：供试品溶液与对照品在相同保留时间有相应的色谱峰。 试品溶液和对照品溶液色谱图中药物的保留时间 与内标物峰的保留时间比值应相一致 示例三：高效液相色谱法分析盐酸乙哌立松片剂 色谱条件: 色谱柱ODS-C18( 4. 6 ×250mm, 5μm), 流动相：甲醇 -水-三乙胺( 80 ∶19. 5 ∶0 . 5 , V/V , 冰醋酸调pH 至7 . 5) , 流速 1ml/min , 柱温室温, 检测波长254nm, 进样量10μl 。 工作液制备：精密称取105℃干燥至恒重的乙哌立松对照品及 内标托哌酮各500mg, 分别置于50ml 容量瓶中, 加甲醇溶解并 稀释至刻度, 摇匀, 制成10mg/