医疗器械生物相容性概述PPT演示课件.ppt

体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 测试系统： 中国地鼠卵巢（CHO）细胞株；中国地鼠肺（CHL）细胞株； 人外周血淋巴细胞 剂量设置 阴性对照组/溶剂对照组；阳性对照组；受试物至少三个剂量组； 最高浓度的选择：决定最高浓度的因素是细胞毒性、受试物在试验系统中的溶解度以及pH或渗透分子浓度(osmolality)的改变。 最高浓度应能明显降低细胞覆盖程度、细胞计数或有丝分裂指数（均应大于50%）。 对于那些相对无细胞毒性的化合物，最高浓度应是5μl/mL，5mg/mL或0.01mol/L。 对于相对不溶解的物质，当浓度低于不溶解浓度时仍无毒性，则最高剂量应是：当处理期结束时，在最终培养液中溶解度限值以上的一个浓度。 * 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 方法： 细胞复苏、培养； 受试物处理； 加入秋水仙素，使细胞停止于分裂中期； 收获细胞，滴片 空气干燥，染色 处理条件： 包括代谢活化和非代谢活化条件 在处理后6和24小时收获细胞 代谢活化条件下，受试物处理时间为3小时 * 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 读片分析： 有丝分裂指数－毒性 染色体结构畸变 染色体数目畸变 * a.染色单体断裂 b. 三辐射体 c. 染色体断片 d. 双着丝点染色体 e. 环状染色体 f. 无着丝点断片 * 啮齿动物微核试验 微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。 最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数PCE中的微核。 如果与对照组比较，处理组PCE微核率有统计学意义的增加，并有剂量-反应关系，则可认为该受试物是哺乳动物体细胞的致突变物。 采用大鼠或小鼠（6～10周） 分析骨髓中嗜多染红细胞中的微核，嗜多染红细胞是红细胞成熟的一个阶段，主核已排出，容易观察微核 * 微核是染色单体或染色体的无着丝粒断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的细胞质内。 * 剂量设置： 阴性对照组/溶剂对照组； 受试物至少三个剂量组； 阳性对照组； 试验方法 给药－临床拟用途径； 预试验中测定时相点，确定正式试验的采样时间； 收集骨髓细胞，离心，涂片，干燥，固定，染色 啮齿动物微核试验 * 读片：嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈淡桔红色。微核大多数呈单个圆形，边缘光滑整齐，嗜色性与核质相一致，呈紫红色或蓝紫色。 计数PCE/NCE（嗜多染红细胞/成熟红细胞）的比例－反映毒性 计数含微核PCE的细胞百分率； 啮齿动物微核试验 * 第3部分 遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验 啮齿动物骨髓中期分析（哺乳动物骨髓染色体畸变试验） 本试验是一项致突变性试验，检测整体动物骨髓细胞染色体畸变，以评价受试物致突变的可能性。使哺乳动物（如大鼠或小鼠）经口或其它适宜途径染毒，动物处死前用细胞分裂中期阻断剂处理，处死后制备骨髓细胞染色体标本，分析染色体畸变。 * 第3部分 遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验 哺乳动物肝细胞程序外DNA合成 试验正常情况下，于细胞有丝分裂周期中，仅S期是DNA合成期。当DNA受损伤时，损伤修复的DNA合成主要在其它细胞周期，称程序外DNA合成，即UDS，因此发现UDS增高，即表明DNA发生过损。? 在体外培养细胞中，用UDS的测量来显示DNA修复合成的主要关键在于如何鉴别很高水平的半保留DNA复制和水平较低（充其量只有半保留DNA复制的5％）的UDS?。这可以用同步培养将细胞阻断于G1期并用药物（常用羟基脲）抑制残留的半保留DNA复制后显示。同步培养可用缺乏必需氨基酸精氨酸的培养基使DNA合成的始动受阻而使细胞同步于G1期。?在这些半保留DNA合成明显抑制和阻断了的细胞中，UDS即可用3H-胸腺嘧啶核苷的掺入增加显示。它可用放射自显影或液体闪烁计数法进行测量。 * 第3部分 遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验 致癌性： 该试验是在试验动物的整个寿命期内，一次或多次将器械、材料和/或其浸提液作用于试验动物，测定其潜在的致肿瘤性。在单项实验研究中，该试验还可检验慢性毒性和致肿瘤性。只有在从其他方面获取到提示性资料时才进行致癌性试验，试验建议与接触途径和作用时间相适应。 方法选择： OECD451致癌性研究 OECD453慢性毒性、致癌性综合研究 * 第3部分 遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验 生殖与发育毒性： 该试验评价器械、材料和/或其浸提液对生殖功能、胚胎发育（致畸性），以及对胎儿和婴儿早期发育的潜在影响。 只有在器械有可能影响应用对象的生殖