微生物标本接种PPT演示课件.ppt

尿培养的培养基 5%血平皿（美国用羊血，欧洲用马血） 伊红美兰平皿（EMB）大肠埃希菌为金属绿 麦康凯平皿 – LF vs NLF 胱氨酸-乳糖-低电解质平皿（CLED） 显色平皿(BBL公司的CHROMagar ，Hardy BluEcoli Biplate) CUTI（Oxoid公司）; CPSID2（生物梅里埃公司）; UriSelect （Biorad公司）; Rambach; others * 蛋白胨，酵母提取物，色原物 科玛嘉显色培养基（BBL） 大肠埃希菌 肠球菌 无乳链球菌 腐生葡萄球菌 * 同样的接种物在科玛嘉显色培养基（BBL）上生长 大肠埃希菌，肠球菌和变形杆菌在血平皿上生长 CHROMagar? Orientation (BBL) * chromID CPS- 生物梅里埃公司的产品快速鉴定大肠埃希菌，变形杆菌和肠球菌 可分离所有尿道病原菌 更好的可操作性 更好的鉴定能力 更高的可靠性 * 尿培养 【操作步骤】 1．培养皿放置至室温，先充分摇匀尿液 2．用1μl定量接种环或用微量移液器无菌吸取10ul尿液接种于羊血平皿和MAC上，然后用无菌接种环划线涂布，置35℃，最好在5～10％co2环境下，孵育18～24小时 3．次日观察结果，根据诊断标准进行诊断，阳性结果做细菌鉴定和药敏。 * 尿培养 【定量标准】 用1μl接种环，结果×1000cfu/ml；用10μl接种环，结果×100cfu/ml。 菌计≥10万cfu/ml，继续鉴定和药敏。 降低标准的情况： 幼儿、儿童或男性的确定的尿路感染，其尿标本定量也可＜10万cfu/ml； 插导管的患者、最近用过抗生素者、大量喝水者、伴发脓尿和有症状者、有尿路阻塞 或由于血源性传播而患有肾盂肾炎者，其尿标本定量也可＜10万cfu/ml； 患有尿道综合征的性活跃的年轻女性，其尿标本定量也可＜100cfu/ml。 * 评价尿培养的标准 病人 标本特征 有意义的菌落形成单位/ml（非皮肤污染） 无症状者 清洁留取 100,000 有症状者，不固定的 清洁留取 10,000 1-2种机会致病菌。若多于2种则认为尿液被污染 有症状者，性活跃女性 清洁留取 100个纯菌落肠杆菌科菌 男性 清洁留取 1000个机会致病菌 任何人 内置导尿管 100,000任意数量机会致病菌 任何人 通过直接导管获得 100任意数量机会致病菌 任何人 通过外科手术从肾脏获得 任意数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任何人 Percutaneous bladder tap经皮膀胱吸取 任意数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任何人 Any任何标本 任何数量金黄色葡萄球菌 不同人 有争议 任何数量的酵母菌 * 尿培养-注意事项 标本留取严格执行无菌操作。 不要将尿液标本接种于增菌肉汤培养基中。 清洁中段尿标本不要进行离心处理。 尿液标本原则上不做厌氧培养。 尿液收集后应立即送检 ，不能送检者可置4℃～8℃冰箱储藏，储存时间≤24小时。 患者应在用药前或停用抗生素后至少三天留取尿液，尿液中勿加防腐剂。 * 痰培养-操作步骤 取适量痰液化剂放入痰标本盒内混匀放置30分钟， 用无菌环挑2～3环标本，分区划线接种于羊血平皿或沙保培养基上、Mac置35℃孵育18～24小时,巧克力平板5％co2 35℃孵育18～24小时。 观察结果，根据细菌生长情况进行鉴定及药敏。 挑取脓液部分涂片，革兰染色镜检。判断标本是否合格。 * 痰培养-操作步骤 痰标本涂片染色显微镜检查的分类：判断标准 比较简单的方法就是确定鳞状上皮细胞数量：细胞数＞ 10/低倍视野，说明混有痰液。 细胞数/低倍视野 WBC ＜10 鳞状上皮细胞＞25 不合格 WBC 10～25 鳞状上皮细胞＞ 25 不合格 WBC ＞ 25 鳞状上皮细胞＞ 25 不合格 WBC ＞ 25 鳞状上皮细胞10～25 可接受 WBC ＞ 25 鳞状上皮细胞≤10 合格 WBC ≤25 鳞状上皮细胞≤25 可接受? * 用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否合格 10鳞状上皮细胞/LPF——拒收！ 弹性纤维，中性粒细胞多，鳞状上皮细胞少，有代表性的好标本 * 形态学鉴别要诀——球菌 革兰阴性双球菌——肾型豆子样，平行纵轴排列=奈瑟菌属 革兰阳性双球菌——拉长，单个纵轴，末端呈点状（柳叶刀状）=链球菌（肺炎链球菌） * 实际革兰氏染色 革兰阴性双球菌：在生殖道标本或脑脊液中多为奈瑟菌属；在下呼吸道分泌物中提示为卡他莫拉菌 革兰阳性双球菌提示肺炎链球菌 * 形态学鉴别要诀——球菌 革兰阳性球菌成对，成链——较小、拉长的、从不4联排列=链球菌属 革兰阳性球菌呈堆排列，通