体外受精技术教育课件.ppt

体 外 受 精 的 概 念;;国 内 外 研 究 现 状;国 内 外 研 究 现 状;体 外 受 精 技 术 流 程;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;（二）精子获能处理方法 1. 血清白蛋白法 将精子与血清白蛋白溶液进行长时间孵育 。 该法由于需要的时间较长，且诱发精子获能的作用不强，故仅在IVF技术研究的初期进行过尝试，具有一定作用，目前仅作为精子获能的一种辅助手段。 2. 高渗盐法 精子表面含有许多被膜蛋白，即所谓的“去能因子”。当用高离子强度溶液处理精子时，这些被膜蛋白将从精子的表面脱落，从而导致精子获能。 由于高离子强度溶液对精子具有渗透打击作用，会影响精子的活力，故目前已废除不用。 ;（二）精子获能处理方法 3.卵泡液孵育法 卵泡液含有来自血清的大分子物质，并含有诱发精子获能和顶体反应的因子，故在精液中添加一定浓度的卵泡液可诱发精子获能。 10%卵泡液，牛受精分裂率（40.3% Vs 87.5%）和囊胚发育率（8.3% Vs 40.4%）均显著下降，但加入50%的卵泡内膜细胞条件液则能 。 卵泡液可以用于精子的获能处理，但不能用于IVF系统。;（二）精子获能处理方法 4. 钙离子载体法 钙离子载体A23187能直接诱发Ca2+进???精子细胞内，提高细胞内的Ca2+浓度，从而导致获能。 0.5?mol/L~1.0?mol/L A23187溶液处理精子5 min，然后加入等量含1% BSA的BO溶液终止A23187的作用，即可将获能精子加到含卵母细胞的受精滴中进行IVF。 注意控制A23187的工作浓度和作用时间，否则会导致精子的活力下降和死亡。 ;（二）精子获能处理方法 5. 肝素法 肝素是一种高度硫酸化的氨基多糖类化合物，与精子结合后，能引起Ca2+进入精子细胞内部而导致精子获能。 最初，制备好的精子常用含有肝素（100mg/L）的获能液预处理15 min，然后加到受精滴中进行IVF。 现直接将肝素（50mg/L）添加到受精液中进行受精。 ;（三）精子获能的检测 1. 精子形态及运动方式的观察 头部膨大，活力增强，超活化 2. 顶体反应的检测 （1）双重染色法 优点：无需昂贵设备，简单易行； 缺点：易发生误判 （2）透射电镜观察 成本高，制片繁琐，可操作性不强。 ;三、IVF培养系统 ; （二）四孔培养板系统 每孔加入500ml受精液和100-150枚IVM的卵母细胞，然后加入获能处理的精子（1.0-1.5）×106个/ml，孵育6h-24h。 优点：操作相对比较简单，受精结果不受石蜡油质量的影响； 缺点：精子的利用率相对较低，IVF效果不如微滴法稳定。 ; 通常以精子穿透率、原核形成率、受精分裂率和囊胚发育率来衡量。其中，囊胚发育率最为可靠。 （一）固定染色法 受精8~10h 精子穿透率和多精子受精率；受精18~20h 双原核形成率 （二）体外培养 受精48h 2-8细胞比例，7d 囊胚发育率，9d 囊胚的孵化率 ;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点;体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点; ;Removal of sperm from the bottom of the Percoll gradient. ;Hemacytometer used for