第九章其它亲和技术.pdf

第三节 其他亲和纯化技术 第九章 第一节 第二节 一、亲和过滤（膜分离） 二、亲和分配（双水相萃取） 三、亲和反胶团萃取（反胶团萃取） 四、亲和沉淀（沉淀分级） 五、亲和电泳（电泳） 第九章 第一节 第二节 2 一、亲和过滤（Affinity Filtration ） 将亲和层析和膜过滤技术结合运用，包括亲 和错流过滤和亲和膜分离。 亲和错流过滤 （affinity Cross Flow Filtration,ACFF）: 是将亲和层析与超滤技 术结合，高分子底物经专一可逆的亲和反应 后，用膜进行错流过滤，兼有亲和层析与膜 过滤的优点。 第九章 第一节 第二节 3 亲和错流过滤 （affinity Cross Flow Filtration ） 基质及大分子亲和配基 基质是聚合物组成的内核，亲和配基连接在内核表 面。配基对提取的目标物进行专一可逆的吸附，形 成复合体； 用膜对混合液进行错流过滤，复合体因分子巨大可 被保留，杂质随液体透过膜，目标物与其它成分分 离。 第九章 第一节 第二节 4 基质 聚丙烯酰胺 菌类的完整细胞（酵母、芽胞杆菌、链球菌等细胞） 琼脂糖、脂质体等 酵母细胞纯化伴刀豆球蛋白A 第九章 第一节 第二节 5 亲和膜 （affinity membrane） 亲和膜利用亲和配基修饰的微滤膜为亲和吸附介质 亲和纯化目标蛋白质，是固定床亲和层析的变型。 将一张微滤膜比喻为一个固定床，膜厚为床层高度。 第九章 第一节 第二节 6 亲和膜优点 传质阻力小，达到吸附平衡的时间短； 配基利用率高，配基用量低； 压降小，流速快； 设备体积小。 第九章 第一节 第二节 7 二、亲和萃取 （Affinity  extraction） 定义：利用偶联亲和配基的PEG为成相聚合物 进行的双水相萃取，在亲和配基的亲和结合 作用下促进目标产物在PEG相（上相）的分配， 提高目标产物的分配系数和选择性。 PEG/Dextran, PEG/无机盐 第九章 第一节 第二节 8 mA 目标分子的亲和分配系数 T和B分别表示上相和下相； m 和m  为有、无配基时目标分子的分配系数； A O m 为配基的分配系数； L C 为配基浓度； L K 为配基与目标分子反应的解离常数。 d 上相配基浓度C 越高，m  越大 LT A 第九章 第一节 第二节 9 亲和萃取纯化过程 亲和分配（进料）， 杂蛋白反萃取（清洗） 目标产物反萃取（洗脱）。 第九章 第一节 第二节