生物学导论 实验一光学显微镜的结构及使用方法.pptVIP

实验一 普通光学显微镜的结构及使用 一、目的要求 ? 熟悉普通光学显微镜的构造和性能 ? 掌握显微镜的使用方法 ? 了解光学显微镜的维护方法 二、实验原理 ? 显微镜可将微小物体放大 ? 物镜和目镜的作用相当于 一个凸透镜 标本放在物镜下方 1 ～ 2 倍焦距之间，在 明视距离为 25cm ，见到放 大的清晰物象 光学显微镜的成像原理 显微镜的重要光学技术参数 ? 分辨率、放大率、 镜口率、焦点深度 和视场宽度等反映 了显微镜的性能和 质量 数值孔径（镜口率） numerical aperture,N.A ? N.A 是物镜前透镜与被检物体之间介质的折 射率（ n ）和镜口角（ α ）半数的正玄之乘 积，即 N.A ＝ n · sin α /2 ? 镜口角 α 是物镜光轴上的物体点与物镜前透 镜的有效直径所形成的角度。 ? 镜口角越大，进入物镜的光通亮就越大， 它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距 离成反比 －－ － －－ 1/2 α objective sample 间质折射率（ n ） ? 空气为 1 ? 水为 1.33 ? 油为 1.5 物镜 N.A 值 · 空气为 0.05~0.95 · 水为 0.1~1.20 · 油为 0.83~1.40 分辨率（ R ） ? 显微镜或人眼在 25cm 的明视距离处，能清楚 地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力 ? 人眼分辨率约为 100um ，光镜为 0.2um ? 计算公式 0.61 λ N.A R = = 0.61 λ N· sin α /2 = 0.61 × 0.5 1.50 × 1.0 = 0.2um （光镜最大分辨率） 注： λ—— 光波波长（白光为 0.5 ） N —— 介质折射率 α—— 镜口角 放大率（放大倍数） ? 放大倍数＝目镜放大倍数×物镜放大倍数 ? 最小倍数＝ 5 × 4 ＝ 20 ? 最大倍数 15 × 100 ＝ 1500 ? 放大倍数的表示用×，如 10 × ,100 × ， … 焦点深度（焦深） ? 在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时， 不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚， 而且在此平面的上下一定厚度内，也能看 得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。 ? 焦深大 , 可以看到被检物体的全层，而焦深 小，则只能看到被检物体的一薄层 ? 在数值孔径 0.95 时约为非常浅的 0.2μ 视场宽度 ? 在显微镜下看到的圆形视场内所能容纳被 检物体的实际范围。视场宽度愈大，愈便 于观察。 ? 视场的大小，是由目镜里的视场光阑决定 的。 ? 视场宽度与物镜的放大倍数成反比 因此，低倍镜看整体，高倍镜看局部 三、内容与方法 （一）显微镜的构造及功能 1. 机械部分 ? 镜筒（ tube ） ? 物镜转换器（ revolving nose-piece ） ? 镜臂（ arm ） ? 调焦器（ focusing adjustment ） coarse focus and fine focus ? 载物台（ stage ） ? 镜柱（ post ） ? 镜座（ base ） 倒置显微镜 2. 光学系统部分 ? 目镜（ ocular ） 5 ×， 10 × ， 15 × ? 物镜（ objective ） 4 × ,10 × ,40 × ,100 × ? 聚光器（ condenser ） ? 光源及光阑 标准物镜的性质 放大倍数 数值孔径 工作距离 * （ mm ） 10 × 0.20 6.5 20 × 0.50 2.0 40 × 0.65 0.6 100 × 1.25 0.2 * 工作距离：物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。 （二）显微镜的使用方法 1. 低倍镜的使用 ? 调光 先检查光强度开关的位置，放到最小，再 通电，亮度适中，物镜对准通光孔，光阑， 光栅，聚光器等 ? 放片 标本朝上，勿放反了 ? 调焦 先粗调，后细调；调过头了，反方向调回 来；记住方向，慢调！