13 基因表达调控与重组DNA技术.ppt

31 二、操纵子理论 通常一个操纵子含有 一个启动序列及数个编码基 因 （ 2 ～ 6 个，甚至更多），还有其它调节序列。 编码序列 启动序列 操纵序列 其他调节序列 (promoter) (operator) P O (coding sequence) 操纵子 结构 32 乳糖操纵子调节机制 阻遏蛋白的负性调节 CAP 的正性调节 协调调节 乳糖操纵子结构 CAP 结合位点 P I I P O Z Y A 调控区 结构基因 I : 阻遏蛋白编码基因 P I : 阻遏蛋白基因启动序列 Z : β - 半乳糖苷酶 Y : 透酶 A : 乙酰基转移酶 结构基因 O : 操纵序列 （阻遏蛋白结合部位） P : 启动序列 CAP 结合位点 调控区 1. 阻遏蛋白的负性调节 （无乳糖） * 阻遏蛋白与 O 序列结合 , 抑制转录 , lac 操纵子关闭 阻遏蛋白 mRNA CAP 结合位点 P I I P O Z Y A RNA 聚合酶 35 CAP: 分解代谢基因激活蛋白 c atabolite gene a ctivator p rotein 同二聚体 cAMP 结合区 DNA 结合区 37 CAP 的正性调节 （有葡萄糖） * cAMP CAP 蛋白 P I I P O Z Y A CAP 结合位点 mRNA 有葡萄糖， cAMP 浓度低 cAMP 与 CAP 结合受阻 转录活性下降 阻遏蛋白 mRNA CAP 结合位点 P I I P O Z Y A RNA 聚合酶 3. 阻遏蛋白与 CAP 的协调调节 * （ 1 ）无乳糖时 , 阻遏蛋白封闭转录， CAP 无作用 （ 2 ） 有乳糖时 , 乳糖操纵子去阻遏 , 虽可转 录 , 但活性很低 , 必须由 CAP 的正性调节来加强 P I I P O Z Y A CAP 结合位点 mRNA 乳糖操纵子 强 的转录活性 既需要乳糖存在 又需要缺乏葡萄糖 42 （一）真核基因结构特点 1. 转录产物为单顺反子 一个基因 —— 一条 mRNA —— 一条多肽链 2. 重复序列 高度重复序列、中度重复序列、单拷贝序列 3. 基因不连续性 非编码序列 内含子 1 2 3 5 3 三、真核基因表达调控 （二） 真核基因转录特点 1. 活性染色体结构变化 对核酸酶敏感、甲基化程度降低、 组蛋白乙酰化修饰 2. 正性调节占主导 真核 RNA 聚合酶对启动子的亲和力极小或根本没有 实质的亲和力，转录起始需依赖多种激活蛋白的作用 3 ．转录与翻译分隔进行 转录在核内进行，翻译在胞浆进行 44 转录（起始）调节实质上是调节蛋白与 DNA 的相互作用 1 、 顺式作用元件： 2 、 反式作用因子： 3 、 mRNA 转录激活及其调节 （三）真核基因转录激活调节 1. 顺式作用元件 * 指结构基因两侧或内部具有调节功能的 DNA 序列，因其作用于自身分子并发挥作用， 所以称 顺式作用元件。 根据位置、性质及作用方式的不同分为 启 动子、增强子和抑制子。 46 真核生物 —— 顺式作用元件 结构基因序列 启动子 (promoter) P 抑制子 (silencer) 增强子 (enhancer) 增强子 (enhancer) 47 ? 增强子 * ： 远离转录起始点、决定组织特异性表达、增强启动子转 录活性的特异 DNA 序列，其发挥作用的方式与方向、距 离无关。 ? 抑制子 * ： 对启动子转录活性起抑制作用的 DNA 序列 负性调节元件 2 、反式作用因子（转录因子） 转录因子、转录调节因子、转录调节蛋白 ? 基本转录因子 ? 转录激活因子 ? 转录抑制因子 绝大多数转录因子属于 反式作用因子 * 真核生物： 由某一基因表达后，通过 DNA- 蛋白质或蛋白质 - 蛋白质相互作用控制另一基因的转录。 A B RNA 聚合酶结合启动子所必须的一组转录因子 ? 基本转录因子 F E B D A RNA pol Ⅱ TATA DNA TATA TF Ⅱ D TF Ⅱ A TF Ⅱ B TF Ⅱ F TF Ⅱ E RNA pol Ⅱ ? 转录激活因子 （正性调节因子） 通过 DNA －蛋白质、蛋白质－蛋白质相互作用起 正性调节作用的转录因子。 ? 转录抑制因子 （负性调节因子） 通过 DNA －蛋白质、蛋白质－蛋白质相互作用起负 性调节作用的转录因子。 与增强子结合的转录因子 与抑制子结合的转录因子 54 真核 RNA 聚合酶 II 不能单独识别启动子，而是由基本 转录因子 TFIID 识别并结合启动子，形成 TFIID －启动 子复合物，然后有一系列的转录因子（如 TFIIA 、 TFIIB 、 TFIIE 、 TFIIF 等）加入形成前起始复合物， 调节转