异甘草素诱导肝癌细胞凋亡机制的研究.pdfVIP

目 录 目 录 摘要 I Abstract Ⅲ 1 文献综述 1 1.1 肝癌的研究进展 1 1.2 肝癌的发病机制 2 1.2.1 遗传因素 2 1.2.2 性别和年龄因素 2 1.2.3 病毒感染与疾病因素 3 1.2.4 生活方式 3 1.3 肝癌的治疗方法 4 1.3.1 外科手术治疗 4 1.3.2 放射治疗 5 1.3.3 化学治疗 5 1.3.4 靶向治疗 6 1.3.5 免疫治疗 6 1.4 细胞信号途径 6 1.4.1 细胞周期 6 1.4.2 细胞凋亡 7 1.4.3 活性氧 7 1.4.4 MAPK 信号通路 8 1.4.5 STAT3 信号通路 8 1.4.6 NF-κB 信号通路 9 1.5 异甘草素研究进展 9 1.5.1 抗肿瘤作用 9 1.5.2 抗炎作用 11 1.5.3 抗菌作用 11 1.5.4 其他作用 11 1.6 目的及意义 12 Ⅰ 异甘草素诱导肝癌细胞凋亡机制的研究 1.7 技术路线 12 2 实验材料与方法 14 2.1 材料 14 2.1.1 细胞系 14 2.1.2 主要试剂及试剂盒 14 2.1.3 关键的实验设备 16 2.2 肝癌细胞的复苏 16 2.3 肝癌细胞的培养及扩增 16 2.4 CCK-8 法 17 2.5 Hoechst/PI 染色法 17 2.6 流式细胞术 18 2.7 蛋白质免疫印迹法 19 2.8 统计学分析 20 3 结果 2 1 3.1 ISL 对肝癌细胞具有杀伤作用 2 1 3.2 ISL 对肝癌细胞的诱导凋亡作用 22 3.2.1 荧光显微镜检测肝癌细胞形态变化 22 3.2.2 流式细胞术测量两种肝癌细胞凋亡数量 22 3.2.3 蛋白质免疫印迹法检测与凋亡相关的蛋白变化 23 3.3 ISL 对肝癌 HepG2 细胞周期分布的作用 24 3.3.1 流式细胞术测量 HepG2 细胞周期分布情况 24 3.3.2 蛋白质免疫印迹法检测一系列周期蛋白质的变化 25 3.4 ISL 对 MAPK 、STAT3 及 NF-κB 信号通路的调控情况 26 3.4.1 蛋白质免疫印迹法检测 MAPK 、STAT3 及 NF-κB 途径的变化 26 3.4.2 蛋白质免疫印迹法检测加入 MAPK 抑制剂后蛋白的变化 27 3.5 ISL 对细胞内 ROS 水平和相关通路的调控作用 28 3.5.1 流式细胞术测量 ISL 对 ROS 产生的调控情况 28 3.5.2 流式细胞术测量 ROS 积累对细胞凋亡的影响 29 3.5.3 蛋白质免疫印迹法验证细胞内 ROS 对上游相关通路的影响 30