多环芳烃暴露致大鼠神经行为的改变及其机制探讨.pdf

目录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表 VII 前言 1 第一部分 多环芳烃暴露对大鼠学习记忆、氧化应激及神经递质含量的影响3 1 对象和方法3 1.1 实验动物3 1.2 主要仪器与试剂3 1.3 实验方法 5 1.4 统计分析方法 12 2 结 果 12 2.1 PAHs 染毒对大鼠体质量的影响 12 2.2 PAHs 染毒对大鼠空间学习记忆能力的影响 13 2.3 PAHs 染毒对大鼠适应能力的影响 14 2.4 PAHs 染毒对大鼠氧化应激水平的影响 15 2.5 PAHs 染毒对大鼠神经递质含量的影响 15 3 讨 论 17 第二部分 多环芳烃暴露致大鼠海马组织差异表达microRNA 的筛选及靶基因预 测 20 1 对象与方法 21 1.1 实验动物与分组21 1.2 主要仪器与试剂21 1.3 实验方法22 2 结 果 23 2.1 大鼠海马组织miRNA 芯片初步筛选结果23 2.2 差异表达miRNA 生物信息学分析25 3 讨 论 28 全文总结 30 创新性分析和不足之处 30 参考文献 31 综 述 39 致 谢 48 个人简介 49 山西医科大学硕士学位论文 多环芳烃暴露致大鼠神经行为的改变及其机制探讨 摘要 目的： 1. 探讨亚慢性PAHs 混合物暴露对雄性SD 大鼠神经行为损伤的影响及可能 机制。 2. 通过基因芯片筛选大鼠海马组织中差异表达的 microRNA ，并进行生物 信息学分析，为PAHs 神经毒性的分子机制提供更多线索。 方法： 1. 健康SPF 级雄性SD 大鼠40 只，随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、 高剂量组，分别腹腔注射植物油、3.2mg/kg·bw、8.0mg/kg·bw、20.0mg/kg·bw PAHs 混合物溶液，隔天注射，共60 天。染毒结束后，采用Morris 水迷宫检测大鼠的 空间学习记忆能力，旷场实验检测大鼠对新异环境的适应能力。 2. 行为学实验结束后，断头处死大鼠，取脑组织并分离海马。采用化学荧 光法测定活性氧含量，硫代巴比妥酸法检测丙二醛含量，水溶性氮蓝四唑盐法检 测超氧化物歧化酶活力；酶联免疫吸附实验检测单胺类神经递质（去甲肾上腺素、 肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺）水平；微板法检测乙酰胆碱含量；比色法检测乙 酰胆碱酯酶活力；紫外比色法检测谷氨酸含量。 3. 提取大鼠海马组织 RNA ，基因芯片筛选差异表达的 miRNA 。运用 Targetscan 数据库对差异表达的miRNA 进行靶基因预测，GO 数据库对靶基因进 行功能预测，KEGG 数据库进行通路分析。 4. 采用SAS 9.4 和Graphpad Prism 7.0 软件进行统计分析和作图，统计学水 准为双侧α 0.05 。 结果： 1. PAHs 染毒后大鼠体质量变化：在染毒第56 天后，与对照组相比，高剂 I 山西医科大学硕士学位论文 量组大鼠体质量明显下降，差异有统计学意义 （P0.05 ）。 2. Morris 水迷宫实验结果：与对照组相比，低、中、高剂量组大鼠目标象 限停留时间逐渐降低，差异均具有统计学意义（P0.05 ）；低、中剂量组大鼠目 标象限休息时间高于对照组，差异均具有统计学意义（P0.05 ）。 3. 旷场实验结果：各组大鼠站立时间总体差异有统计学意义 （P0.05 ）， 高剂量组与对照、低剂量组相比站立时间显著降低，差异有统计学意义（P=0.017 ， P=0.010 ）。 4. 氧化应激反应：各组大鼠活性氧含量总体差异有统计学意义（P=0.031 ）， 与对照组相比，中剂量组活性氧含量升高（P=0.007 ）。 5