检测孕妇血浆中胎儿游离DNA产前诊断胎儿血型.pdf

目录 中文摘要I 英文摘要III 常用缩写词中英文对照表Ⅴ 前言1 第一部分 产前无创检测胎儿ABO基因型 1 1 对象与方法1 1.1研究对象1 1.2试剂与仪器2 1.3血浆制备2 1.4游离DNA提取2 1.5 Real-time PCR法确定胎儿ABO基因型3 1.5.1引物设计3 1.5.2扩增体系3 1.5.3结果判断3 1.6 胎儿甲基化 RASSF1A 基因检测4 1.7新生儿 ABO 血型检测4 2 结 果5 2.1 胎儿ABO基因型检测结果5 2.2 胎儿甲基化 RASSF1A 基因检测6 2.3 ABO血型血清学结果6 3 讨 论7 4 结 论9 第二部分 产前无创检测胎儿RhD基因型9 1对象与方法9 1.1研究对象10 1.2试剂与仪器10 1.3血浆制备10 1.4游离DNA提取10 1.5 Real-time PCR法确定胎儿RhD基因型10 1.5.1引物设计 10 1.5.2扩增体系 11 1.5.3结果判断 11 1.6 胎儿甲基化 RASSF1A 基因检测 11 1.7新生儿 RhD血型检测12 2 结 果12 2.1 胎儿RhD基因型检测结果12 2.2 胎儿甲基化 RASSF1A 基因检测 12 2.3产前胎儿RhD基因与新生儿RhD血清学血型比较13 3 讨 论14 4 结 论16 参考文献17 综 述19 致 谢29 个人简介30 山西医科大学硕士学位论文 检测孕妇血浆中胎儿游离DNA 产前诊断胎儿血型 摘 要 目的： 针对ABO及RhD基因结构特点,建立一种以孕妇血浆中胎儿游离DNA为材料， 产前准确、快捷预测胎儿血型的技术，找到无创产前诊断新生儿溶血病的新方法。 方法： （1）选择来本院进行抗体筛查的身体健康的O 型血孕妇为研究对象，首次妊 娠且为单胎，丈夫为非O 血型，共收集孕妇血浆样本83份，提取胎儿游离DNA。 设计出针对ABO 基因保守特征性突变的非O 与B 引物，利用荧光PCR 技术检测胎 儿ABO 基因型，对两种基因均无扩增的样本，通过检测RASSF1A 基因来验证胎儿 游离DNA 的存在。孕妇分娩后采集胎儿脐带血，血清学方法确定新生儿ABO表型， 并与产前基因预测结果对比。（2）选择来我院进行产前检查的孕单胎身体健康RhD 阴性孕妇为研究对象，丈夫为RhD 阳性，共收集孕妇血浆样本25例，提取胎儿游 离DNA。利用荧光PCR 方法扩增RhD 基因 （内含子4，外显子5,7和10）的选定 区域检测胎儿RhD 血型，对胎儿血型为RhD 阴性样本检测RASSF1A 基因来验证 胎儿游离DNA 的存在。孕妇分娩后采集胎儿脐带血，血清学方法确定新生儿RhD 表型，并与产前基因预测结果对比。 结果： 在83份O 型血孕妇血浆标本中，有79份产前胎儿ABO 基因检测结果与产后 新生儿血清学血型相一致： A 型的准确率为91.30％(21／23例)，B 型的准确率为 97.22％(35 ／36例)，O 型的准确率为100．00％(23 ／23 例)，1例标本未提取出胎 儿游离DNA。在25份RhD 阴性孕妇血浆样本中，有23份样本产前基因检测和产 后血清学方法检测RhD血型一致，1例样本归类于不确定组，方法总体准确度为92% I 山西医科大学硕士学位论文 （23/25），该方法灵敏度为 100%，特异性为85.7%，阳性预测值为94.4%，阴性 预测值为100%。 结论： 孕妇外周血中存在的胎儿游离DNA 可用于胎儿血型无创产前诊断，为早期诊 断新生儿溶