基于5-HT和TRPV1通路探讨芍药甘草汤对炎症后肠易激综合征大鼠腹痛的干预机制.pdf

目 录 中文摘要 I 英文摘要 IIII 常用缩写词中英文对照表 VI 前言1 第一部分芍药甘草汤对炎症后肠易激综合征大鼠腹痛的干预作用2 1 材料与方法2 1.1 材料2 1.2 方法3 2 结果7 2.1 SGD 主要活性成分UHPLC-Q-TRAP-MS/MS 分析及质量评价7 2.2 大鼠病变活动指数测定10 2.3 大鼠结肠组织病理学改变及病理评分 11 2.4 大鼠内脏疼痛阈值测定12 3 讨论13 4 结论14 第二部分基于5-HT 通路探讨芍药甘草汤对炎症后肠易激模型大鼠的干预机制15 1 材料与方法15 1.1 材料15 1.2 方法16 2 结果20 2. 1SGD 对PI-IBS 大鼠血浆中5-HT 水平的影响20 2.2SGD 对PI-IBS 大鼠肠道嗜铬细胞数目的影响20 2.3 SGD 对PI-IBS 大鼠结肠组织5-HT 通路相关基因表达的影响2 1 3 讨论22 4 结论24 第三部分TRPV1 蛋白在芍药甘草汤治疗炎症后肠易激模型大鼠中的作用25 1 材料与方法25 1.1 材料25 1.2 方法26 2 结果32 2. 1 SGD 对PI-IBS 大鼠结肠组织中TRPV1 基因及蛋白表达的影响32 2.2 SGD 对大鼠结肠组织Calcineurin 基因及CamkII 相关蛋白表达的影响32 2.3 SGD 对HEK293 细胞存活率的影响33 2.4 SGD 对HEK293 细胞中TRPV1 基因表达的影响33 3 讨论35 4 结论37 参考文献38 综 述4 1 致谢46 个人简介47 山西医科大学硕士学位论文 基于5-HT 和TRPV1 通路探讨芍药甘草汤对炎症后肠易激综合 征大鼠的干预机制 摘要 目的： 炎症后肠易激综合征（post inflammatory-irritable bowel syndrome ，PI-IBS ）是 一种发病率呈逐年升高趋势的胃肠道功能性疾病,严重降低患者的生活质量，并且 占用大量医疗资源。目前临床应用的主要治疗西药多以改善症状和预防发作为主， 疗效不佳且副作用多，而中医药治疗 PI-IBS 取得了较为显著的疗效。芍药甘草汤 （SGD）是具有舒筋柔肝、缓急止痛的经典名方，其在镇痛、抗炎方面的作用受到 广泛关注，但是否可缓解PI-IBS 的腹痛症状尚未见报道。本论文旨在探究SGD 对 PI-IBS 大鼠腹痛的干预作用及潜在的作用机制。 方法： 采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS ）制备炎症后肠易激综合征 （PI-IBS ）大鼠模 型，以病变活动指数（DAI ），腹部收缩反射实验 （AWR ），结肠组织病理学变化 为指标，明确SGD 对PI-IBS 大鼠腹痛症状的改善作用；以血清及结肠组织为研究 对象，采用免疫组织化学法测定结肠组织中嗜铬细胞（EC ）细胞数量， UHPLC-QTRAP-MS/MS 法测定大鼠血浆中5-HT 的水平，分析SGD 对PI-IBS 大鼠 5-HT 信号通路的干预作用；最后采用实时荧光定量PCR 及western blot 法从基因和 蛋白水平阐明5-HT 信号通路在SGD 改善PI-IBS 腹痛中的作用。此外，我们从动物 和细胞两个维度，基因和蛋白两个水平明确了TRPV1 信号通路在SGD 改善PI-IBS 腹痛中的作用。 结果： I 山西医科大学硕士学位论文 1.与对照组相比，PI-IBS 模型大鼠的DAI 明显升高，内脏痛觉敏感性升高（P ＜0.05 ）且结肠组织形态发生病理改变，以上均提示PI-IBS 模型制备成功。经SGD 治疗 14 天后上述情况均得到不同程度的缓解