基于16S rDNA技术与代谢组学探究枯草杆菌二联活菌治疗急性肝损伤的作用机制.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要IV 常用缩写词中英文对照表VIII 前 言1 1 材料与方法2 1.1 实验材料2 1.2 实验方法及步骤2 1.3 统计学分析6 2 结 果7 2.1 肝功能变化7 2.2 肠道屏障功能变化7 2.3 肝脏HE染色病理改变7 2.4 大鼠肠道菌群16SrDNA扩增子测序结果8 2.5 大鼠血清代谢组学液相色谱质谱研究结果12 2.6 代谢组学与16SrDNA 的关联分析16 3 讨 论18 3.1 大鼠急性肝损伤模型建立18 3.2 枯草杆菌二联活菌对ALI大鼠肝功能的保护作用18 3.3 枯草杆菌二联活菌改善ALI的作用机制19 4 结 论22 参考文献23 综 述26 致 谢34 个人简历35 山西医科大学 （博）硕士学位论文 基于16S rDNA技术与代谢组学探究枯草杆菌二联活菌 治疗急性肝损伤的作用机制 摘 要 目的： 本实验通过硫代乙酰胺 （TAA）建立急性肝损伤(ALI）大鼠模型，观察复合益 生菌制剂 （枯草杆菌二联活菌肠溶胶囊 LCBE）对急性肝损伤的防治作用，利用16S rDNA扩增子测序检测粪便肠道菌群变化、液相色谱质谱法检测血清代谢组学变化， 并进行关联性分析，分析防治机制，为其治疗急性肝损伤提供理论依据。 方法： 将36 只雄性SD大鼠随机分为正常对照组 （Nor）、ALI组 （TAA）、干预组 （TAA+LCBE），每组12只。ALI组及干预组分别以200mg/kg体重剂量的TAA于实 验第6、7天对大鼠行腹腔注射制备ALI模型，对照组给予等量生理盐水腹腔注射。 同时，干预组从实验第1天至实验结束，给予200mg/kg体重剂量的LCBE灌胃，每 天一次，其余两组给予等量生理盐水灌胃，共8天。第9天隔夜禁食后，麻醉状态 下腹主动脉取血，应用ELISA法检测ALT、ALB、TBIL反映肝功能,检测D-乳酸反映 肠屏障，应用液相色谱质谱法检测血清代谢组学变化及KEGG富集分析；留取大鼠 肝脏行HE染色；同时无菌操作下留取结肠远端新鲜粪便行16SrDNA扩增子测序检 测肠道菌群变化。并采用 Pearson统计学方法对差异菌群及差异代谢物进行相关性 分析。 结果： 1. 各组大鼠肝功能变化：与对照组相比，ALI组ALT、TBIL显著升高，ALB显 著下降(P＜0.05)，差异有统计学意义。与ALI组相比，干预组ALT、总胆红素有下 降趋势，白蛋白有升高趋势，无显著差异(P＞0.05)。 I 山西医科大学 （博）硕士学位论文 2. 各组大鼠肠道屏障功能变化：ALI组较对照组D-乳酸显著升高（P＜0.05）， 差异有统计学意义。经LCBE治疗后显著降低 （P＜0.05），差异有统计学意义。 3. 各组大鼠肝脏HE染色病理结果: 与对照组相比，ALI组肝板结构破坏，部 分区域肝细胞可见气球样变、点状及嗜酸性坏死，肝血窦扩张，炎细胞浸润。而干 预组肝小叶汇管区少量炎细胞浸润，中央静脉轻度扩张淤血，周围有少量肝细胞点 状坏死。 4. 大鼠粪便16S rDNA扩增子测序结果: 4.1Alpha多样性指数分析提示LCBE治疗可显著增加ALI大鼠肠道菌群多样性， 丰富肠道菌群。 4.2大鼠肠道菌群分布情况 4.2.1门水平物种相对丰度提示，三组大鼠的前5种肠道优势菌门均为厚壁菌 门 、拟杆菌门、变形菌门、疣微菌门、放线菌门，但在各组肠道菌群中所占比例 仍然存在明显差异。 4.2.2 门水平差异物种分析提示，与对照组相比，ALI组厚壁菌门增多，拟杆 菌门减少 （P＜0.05)；经治疗后，干预组拟杆菌门丰度有所回升，厚壁菌门丰度有 所下降 （P＞0.05)。 4.2.3属水平差异物种分析提示，与对照组相比，ALI组丁酸弧菌属 、拟杆菌 属 、Muribaculum、考拉杆菌属、副杆状菌属、另枝